利用分子标记来定位突变基因，最重要的就是要根据你要选用的分子标记类型来设计适合的引物。primer 5是专门用于设计引物，简单易学，功能强大
工具/原料
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primer5.0 软件
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目的区域的核苷酸序列
方法/步骤
1
打开软件，点击File-New-DNA sequence
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弹出一个新窗口，将核苷酸序列复制到窗口中，之后点击primer
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再次弹出新的窗口，此时页面上会给出一对引物信息，不过一般这对引物质量不好，根据你设计需要，选择Search，修改引物设计参数
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确定后，会得到一个search results，里面给出了搜索到的搜有引物的信息，点击每个引物，在primer premier窗口中会显示这个引物的具体信息，除引物设计一般需要注意的点以外，还需要注意是否有二级结构和错配
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选好上下游引物后，点击primer premier中的edit primers，可以得到可复制的引物序列。这样引物就设计好了，如果有参考基因组的话，最好在参考基因组中blast一下设计的引物，看是否是单拷贝，这一点很重要
注意事项
二级结构、错配
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