BIOGHC Elitefast SYBR Kit生产的经化学修饰的热启动聚合酶,有效避免了非特异扩增和引物二聚体的形成,具有高度的特异性。BIOGHC Elitefast SYBR kit具有非常强的抗干扰能力,能够对土壤、粪便、肿瘤和血液来源的复杂样本中的靶基因进行检测,也能不经处理直接对菌落、血液、土壤和粪便中的靶基因进行检测分析。试剂盒以预混液的形式包装,使用极其方便。
工具/原料
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ddH2O,2×BIOGHC Elitefast SYBR Mastermix,50×ROX Reference Dye
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2xBIOGHC Elitefast SYBR Mastermix,上下游引物 (10μM),模板DNA,50 × ROX
方法/步骤
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1、BIOGHC Elitefast SYBR Master Mix包含dNTP Mix、Mg2+、SYBR Green I、BIOG热启动聚合酶。
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2、一般来说反应体系中引物终浓度为0.2μM可得到较好的扩增效果。当反应结果不理想时,可以在0.1-1.0μM范围内调整引物浓度。
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3、qPCR反应灵敏性高,模板量的准确性对结果影响很大,建议将模板适度稀释后加入,或用50ul反应体系。
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4、模板体积最好不超过反应体积的10%,操作过程中避免强光照射。5、扩增产物长度请选择在100bp-500bp范围内。
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6、反应条件:95℃加热6-10分钟,以激活热启动DNA聚合酶,然后95℃ 5-15秒,60℃ 30-35秒,进行40个循环。反应条件可根据目标片段的大小、引物的Tm值等适当调整。
注意事项
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干冰或蓝冰运输,-20°C避光保存,避免反复冻融。如每次使用量较少,推荐小份分装使用。
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-20℃保存条件下,有效期为6个月。
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