最近小编收到很多问题，其中一个就是下面小编为大家整理一下关于亲和层析中小柱子预实验的具体步骤的步骤，希望这些方法能够帮助到大家。
方法/步骤
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首先，自制的简易柱子，直径约为1cm，长度约为2cm，在柱子的下端加入蒸馏水，并关闭柱子的出口。
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然后，将琼脂糖凝胶倒入柱子，让填料自然沉降，依次用二到五倍的柱子体积的无菌水、8mol/L的尿素、无菌水洗柱子。
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然后，缓慢加入5ml的硫酸镍，至柱子的颜色由白色变为蓝色，待蓝绿色收集液体滴下来为止。
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然后，用二到五倍体积的PBS缓冲液平衡柱子，再将粗蛋白样品进行上样，用梯度浓度50mmol/L、70mmol/L、150mmol/L、250mmol/L咪唑进行过柱，流速约为1ml/min。
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然后，以每个浓度用1.5ml的Eppendorf收集八管，再用二到五倍体积的无菌水洗柱子，再用二到五倍的50mmol/L的EDTA洗柱子，除去NiSO4，待至无色状态。
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最后，用多倍体积的无菌水进行洗柱子，将手机液10%的分离胶进行SDS—PAGE分析。
注意事项
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上述方法为小编整理所得，希望能够帮助到大家。
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上述图片来源于网络，感谢原图作者的分享。
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