在传染病科,以及检验科,对于患者感染的细菌进行培养,并且进行药物敏感实验筛选抗生素,对于患者的临床治疗意义重大。本经验旨在提供一种可靠的对细菌浓度进行检测的方法,用于药物敏感实验,或者实验室进行细菌浓度测定。
工具/原料
1
紫外分光光度计
2
石英比色杯
方法/步骤
1
取已经培养好的细菌琼脂平板,加入2ml新鲜的生理盐水,用L棒轻轻将菌落刮下,收集在1.5 ml EP管中。
2
取10 μl菌液涂布在载玻片上,干燥固定后进行格兰染色鉴定。
3
将EP管置于离心机,5000RPM离心5min。
4
弃上清,取1ml完全无抗1640培养基重悬细菌;取新的1.5 ml EP管,加入950 μl生理盐水,及50 μl菌液,混匀(稀释20倍)。
5
在分光光度计上测定OD值:以生理盐水作为空白对照调零,测定稀释20倍的菌液的吸光度,若OD值在0.3-0.7的范围内,则按照1OD=1.0×109 CFU/ml计算原始菌液浓度。若OD值大于0.7且小于1,则取原始菌液进行40倍稀释后测定吸光度值。若OD值小于0.3,则取原始菌液进行10倍或5倍稀释后测定吸光度值。务必将OD值调整到0.3-0.7的范围内。
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