本方法使用埃泽思生物Xeno-Free人间充质干细胞培养基培养，该培养基可应用于人骨髓、脂肪、脐带等组织来源的间充质干细胞的原代分离、扩增与传代培养，并保持其多向分化潜能。本产品内毒素水平远低于中国药典标准，生产过程遵循ISO9001体系,并符合GMP指导原则。
工具/原料
1
Xeno-Free人间充质干细胞培养基（Applied Cell™:AC-1001003）
2
Serum-Free细胞冻存液（Applied Cell™: AC-1001005/1001006）
3
人脐带间充质干细胞（Applied Cell™: AC-2001003）
4
人脂肪间充质干细胞（Applied Cell™: AC-2001004）
5
Xeno-Free细胞消化液（Applied Cell™: AC-1001024/1001025 ）
方法/步骤
2
在超净台/安全柜中，吸掉原有培养基，加入PBS溶液清洗一次，加入Xeno-Free细胞消化液（AC-1001024/1001025）使之完全覆盖皿/瓶底。
3
室温孵育4-5分钟或37℃孵育2-4分钟，显微镜下观察大部分细胞脱离皿底即停止消化。
4
加入消化液2倍体积的人间充质干细胞培养基，用移液器轻轻吹打瓶壁上未完全脱离的细胞，并轻轻吹打混匀，使细胞完全分散。
5
将细胞悬液转移到15 mL离心管中，1000 rpm离心3 min。
6
弃上清，加入人间充质干细胞培养基，重悬细胞，计数。1：3-1：4比例传代，或按1-2x104 cells/cm2 传代，均匀铺在培养皿/瓶中，置于37℃，5%CO2 培养箱中培养。
注意事项
以上步骤应在无菌条件下操作
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