试剂盒法(10次)中提
工具/原料
准备:无水乙醇、PBS、15ml离心管
方法/步骤
1
10.5mLBIOG析出液加入59.5mL无水乙醇 18mLBIOG洗涤液加入42mL无水乙醇
2
取15ml离心管,加入7.5mLBIOG结合液,再加入2.5mL血液,轻轻振荡混匀,室温放置5分钟,5,000 rpm 离心 3分钟。
3
彻底弃上清,加入625μLPBS,悬浮沉淀;加入2500 μLBIOG裂解液,250μLBIOG消化液,充分振荡混匀,56℃水浴10 分钟至细胞完全裂解。
4
加入6250μL配置好的析出液,轻轻颠倒混匀。
5
将吸附柱放入收集管内,将4813ul上述溶液转入吸附柱内,静置2分钟,5000 rpm 离心2分钟,弃收集管内废液。
6
将吸附柱放回收集管内,加5000 μL配置好的洗涤液至吸附柱内,5000rpm 离心1分钟,弃收集管内废液。
7
将吸附柱放回收集管内,5000 rpm 离心2分钟,离去残留的洗涤液。
8
取出吸附柱,放入新的15 mL 离心管内,加入250-400 μLBIOG洗脱液,静置3分钟,5000 rpm 离心2分钟,收集DNA溶液。提的DNA即可用于下一步实验或-20℃保存。
注意事项
1
配制好的析出液如出现沉淀,可在37℃溶解,摇匀后使用。
2
第四步如有半透明悬浮物,不影响DNA的提取与后续实验
3
如需浓缩核酸,则可继续进行后续步骤。 于洗脱液中加入800ul无水乙醇,轻轻颠倒混匀,5,000 rpm 离心5分钟,弃上清,开盖室温放置5min,待乙醇挥发后,加入30-50ul洗脱液溶解核酸。提取的DNA即可用于下一步实验或-20℃保存
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