印记膜 ，摇床 ，恒温箱。
超敏ECL试剂盒（Elabscience,E-CS-0050c)
将印迹膜置于封闭液中，室温轻轻震荡20-60min，以封闭掉非特异性位点。
弃去封闭液，加入适量的一抗溶液，于摇床上轻轻震荡1h。（也可将印迹膜与一抗在2-8°C条件下孵育过夜。）
将印迹膜于洗脱液中悬浮清洗5min以上，并更换洗脱液4-6次。
将印迹膜与适量的HRP-结合物置于摇床上轻轻震荡，室温孵育1h。
重复步骤3以去除未结合的HRP-结合物
将A液和B液以1：1混合即得到超敏ECL化学发光工作液，推荐使用量为0.1mL/cm2。
将工作液与印迹膜于室温孵育5min。
将印迹膜置于暗盒中，蛋白面朝上，于暗室中进行X-光胶片曝光。
建议首次曝光时间为60s，进而通过调整曝光时间获得较好的实验结果。
ECL底物——增强型化学发光底物能检测抗体以及Western blot或ELISA标签中的HRP活性。经济性——与同类化学发光底物相比花费更少。pg级灵敏性——高灵敏性能快速检测更广泛的蛋白范围。信号稳定——发光时间长，能进行多次曝光信号强——发光信号比普通的以鲁米诺为基础的HRP检测体系强两倍以上工作液稳定性高——工作液室温稳定存放8小时；试剂盒能在室温下保存一年。节约抗体——需要更少（稀释更多）的一抗和二抗校正曲线范围广——校正曲线的范围从4.00–8000pg，R2为0.992。
勿将超敏ECL化学发光工作液暴露在阳光或强光下，否则会导致其失活。建议将工作液保存在棕色瓶中，并避免长时间暴露在阳光下，实验室光照对工作液影响不大。
使用生物素/亲和素体系时，避免使用脱脂奶粉作为封闭液，因为脱脂奶粉中含有多种内源性生物素，容易产生非特异性信号。
使用充足的洗涤缓冲液、封闭液、抗体稀释液和底物工作液去覆盖印迹膜，以确保印迹膜处于湿润状态。使用大量的封闭液和洗涤液能减少非特异性信号的产生。
叠氮钠是HRP酶的抑制剂，会对反应体系产生干扰，因此缓冲液中应避免使用叠氮钠做为防腐剂。
印迹膜与ECL化学发光工作液孵育后5-30min内的发出的荧光是最强的，随后荧光会随着时间的延长减弱。蛋白点荧光较弱时可以适当延长曝光时间。