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microRNA二代测序分析流程

关于microRNA二代测序分析的流程一直没有搞清楚,幸好看到了下面的文章,分享给大家一起学习。
方法/步骤
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背景:microRNA是一类大小为21-23nt的非编码小RNA分子,其通过与mRNA相互作用影响目标mRNA的稳定性及翻译,最终诱导基因沉默,调控基因表达,细胞生长,发育等生物过程。基于第二代测序技术的microRNA测序,可以快速鉴定出已知的microRNA,也可以预测出新的可能microRNA,并分析其差异,为研究microRNA对细胞进程的作用及其生物学影响提供了有力工具。这里我们对microRNA二代测序结果的分析处理进行简析,下图能够很清晰地说明microRNA二代测序结果的处理步骤。

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microRNA 质量分析结果

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比对注释将测序得到的序列与miRBBase以及其他非编码数据库ncRNA,pirna,Rfam数据库里的序列进行比对,对已知microRNA进行注释

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分类注释将测序得到的序列与物种所对应的基因组数据库比对,对有注释的reads的来源进行分类统计,鉴定并统计出已知的microRNA以及各种不同种类的RNA分子。 如图,经过与数据库进行分别比对,可以鉴定并统计出包括tRNA,rRNA, snoRNA, snRNA的数量及分布。

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新microRNA预测对于未注释上的序列,我们将其与该物种全基因组序列进行比对分析,通过折叠模型预测新的microRNA,通过折叠模型分析,若有序列位于茎环结构上,则初步判定该序列为一个候选的新microRNA。对于预测出的新microRNA,我们会统计并列出其所位于的染色体,起始位置,终止位置,正负链,以及数目,长度,GC含量,最小自由能等数值。对于新microRNA,我们还会计算并绘制出其前体的二级结构,以及其与成熟microRNA之间的位置关系。

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mircoRNA作用靶基因预测采用miranda软件,对microRNA序列以及对应物种的基因组cDNA序列进行可能的靶位点预测 Miranda软件比对结果示意图如下:

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microRNA在正常发育过程以及疾病发生过程中具有重要的作用,在诊断和治疗领域具有光明的应用前景。基于高通量测序平台的microRNA测序技术突破了之前研究手段的局限性,不但可以检测到microRNA表达差异,而且可以研究microRNA的3’异质性,以及未发现的新的microRNA,为更加灵活、深入研究microRNA提供解决方案。上海丰核拥有强大的生物信息学团队,能够根据不同客户的要求进行深入和标准的数据分析服务,提供能够直接应用于文章发表的数据和图表。有关更多的详细信息可以查询其官方网站。

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