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抗噬菌体菌株的筛选方法

最近小编收到很多问题,其中一个就是下面小编为大家整理一下关于抗噬菌体菌株的筛选方法的步骤,希望这些方法能够帮助到大家。
方法/步骤
1

首先,是固体法将生长成熟的敏感菌斜面,环刮下斜面上的菌体。将此菌液倒人灭菌荡3min,然后过滤制成菌悬液,控制其浓度为10的装有玻璃珠的三角瓶中,在摇床上振,加人10ml 灭菌生理盐水,用接种个/ml。取此菌悬液0.1ml和菌体液0.1mI(浓度107 个/ml以上),同时加到牛肉膏蛋白胨平板上,使敏感菌浓度与噬菌体浓度比达1: 100 以上。

2

然后,用玻璃棒将平板上的菌液与嘴菌体液混合涂匀,于37C 下培养1~2d 并进行观察,如有少数细菌形成菌落,则这些西落有可能具有抗性。将这些菌落分别在加人0 1ml噬菌体液(浓度10个/ml)的平板上划线分离。反复进行几次,直至菌落生长正常,将筛选出的抗嘴菌体菌株保藏备用。为证实噬菌体是否与敏感菌起作用,在对照培养基上不加嘴菌体液而只加敏感菌液,以便统计死亡率。

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然后,是液体法,将敏感菌悬液1mI(浓度为10 个/ml)和噬菌体液1ml(浓度107 个/ml以上)同时接种到牛肉膏蛋白胨培养液中,培养24 h后加入Iml浓度为10 个/ml的噬菌体液再继续培养。当培养液变清又重新变浑独后,再加噬菌体反复感染,培养一定时间后进行平皿分离,从中筛选出抗性菌株保藏备用。

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然后,是诱变法,将敏感菌按常规紫外线诱变处理,然后取诱变后菌悬液0.2 ml 加到牛肉膏蛋白胨平板上,长出菌落后,用接种环挑取一环接种到加有0.1ml噬菌体液(浓度为107 个/ml)的斜面上,进行培养观察。如果斜面上不出现噬菌斑,菌苔生长良好,而对照菌落在同样的噬菌体液斜面上培养后出现噬菌斑甚至不长,则认为前者具有抗性。将这样的斜面挑选出来,分离纯化备用。这样,菌种不接触噬菌体,可以避免因此而产生溶源菌株。

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然后,摇瓶发酵复筛,将用上述方法初步确定具有抗性的菌株接种到含有噬菌体液0.1ml(浓度为107 个/m)的摇瓶中发酵培养数天,测定其生物效价,同时接敏感菌对照摇瓶(加和不加噬菌体)。

6

最后,如果含有噬菌体液的摇瓶发酵单位不受影响,而敏感菌在含有噬菌体液的摇瓶中没有效价,则前者进一步被认为是具有抗性的。然后将效价高于对照菌株的原始斜面挑选出来留种。固体平板上噬菌斑检查,将上述经过复帝后挑送出来的抗性商林母瓶菌液a.5ml与浓度在10 个。

注意事项

上述方法为小编整理所得,希望能够帮助到大家。

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