微生物培养步骤及平板划线要注意哪些问题？

培养基

接种环

超净工作台

酒精灯

菌种

有些微生物的培养在样品处理时要稀释几个浓度梯度，一般是6个梯度。首先将样品在无菌的环境里面剪碎，然后在电子天平上称量1.00g，倒入装有9ml的生理盐水的试管中，再放到旋涡混合仪上震动均质。6个梯度的每个试管装9ml的生理盐水，然后用移液枪从上一个浓度吸1ml到一个浓度，这就是浓度梯度稀释。

制作好浓离扯三度样品浓度梯度后进行倒平板涂布。把事先配好的固体培养基放到加热器上面就热融化，融化好稍冷却后在超净工作台上将培养基倒到每一个培养皿上面，晾至冷却凝固。然后用移液枪从每个浓度吸100ul液体到培养基。

培养基加入样液后进行涂布。涂布是用三角涂布棒弄的，需要注意的问题塑特是在涂布前要在酒精灯上灼烧涂布棒（杀菌），等待涂布棒冷却后才能在培养基上涂布。如果涂布棒温度太高会把菌烫死，这样培养基上就长不出细菌了。

划线分离纯化的时候是从上面涂布得到的细菌中，用接种环挑取一个单菌落，在培养基上划z型的线，划线示意图如下。

划线的时候要注意接种环取的菌量不能太多贪篇，否则细菌划不开，培养基上长了一大片，起不到纯化的作用。第二是用酒精灯灼烧了接种环后一定要等到接种环冷却后才可以划第二次，不然温度太高会烧死菌，这样划出来的线是长不出菌来的。