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大肠杆菌H抗原检测

大肠埃希氏菌(Escherichia coli)通常称为大肠杆菌,1885年由Theodor Escherich发现,分布在自然界,大多数是不致病的,主要附生在人或动物的肠道里,为正常菌群,少数的大肠杆菌具有毒性,可引起疾病。婴儿出生后大肠杆菌即随哺乳进入肠道,其代谢活动能抑制肠道内分解蛋白质的微生物生长,减少蛋白质分解产物对人体的危害,还能合成维生素B和K,以及有杀菌作用的大肠杆菌素。正常栖居条件下不致病。但若进入胆囊、膀胱等处可引起炎症。在肠道中大量繁殖,每个人每天平均从粪便中排出1011到1013个大肠杆菌,几乎占粪便干重的1/3。各种粪便细菌和类似的生活在土壤或植物降解物中的细菌(最常见的是产气肠杆菌,学名Enterobacter aerogenes)一起被归为“大肠菌群”(coliform)。大肠菌群被定义为好氧或兼性厌氧。不形成内孢子,能发酵乳糖产生酸及气体的一群微生物。在环境卫生不良的情况下,常随粪便散布在周围环境中。若在水和食品中检出此菌,可认为是被粪便污染的指标,从而可能有肠道病原菌的存在。因此,大肠菌群数(或大肠菌值)常作为饮水和食物(或药物)的卫生学标准。常引起流行性婴儿腹泻和成人肋膜炎等等。侵入人体一些部位时,可引起感染,如腹膜炎、胆囊炎、膀胱炎及腹泻等。人在感染大肠杆菌后的症状为胃痛、呕吐、腹泻和发热。感染可能是致命性的,犹其是对孩子及老人。       利用血清学分型是鉴别各种类型大肠杆菌的重要方法之一,现在已知,某型别的大肠杆菌是婴儿流行性腹泻的重要病源,这些型别的菌株称为肠道致病菌性大肠杆菌。同时也发现人类某些大肠杆菌感染疾患--如胆道和尿道感染,以及动物中幼畜、幼禽的大肠杆菌病和型别有关。因此对大肠杆菌血清学分型的研究对开展肠道感染病的防止,保护儿童健康,以及促进畜牧业发展都具有一定的实际意义。
工具/原料

洁净玻片、生理盐水(0.85%的氯化钠溶液)、接种环或移液器

方法/步骤

【血清学分型方法】      大肠杆菌H抗原凝集反应所用的抗血清是一套共63种,大肠杆菌H抗原之间的强烈交叉反应,与其O抗原相比是罕见的。       由患者粪便或其他材料分离的革兰氏阴性杆菌,经初步生化检查,疑似大肠杆菌时,经过半固体培养基穿刺一次,挑取已生长到培养基顶部的菌落,转接到固体培养基上,过夜培养,先分别用各种多价血清做玻片凝集试验,阳性反应时,再与相应的单价血清做玻片凝集试验,作出诊断。1. 在使用前最好恢复温度到室温。2. 在洁净玻片上用接种环滴加两滴彼此分离的生理盐水。用接种环挑取1环经过穿刺培养的菌落,分别与玻片上的生理盐水混匀。3. 用接种环滴加1~2滴血清于玻片上一个菌落与生理盐水的混合液中,另    一个菌落与生理盐水的混合液中加入一滴生理盐水作为对照。4. 用接种环分别混匀玻片上的两种混合液。5. 轻轻摇动玻片1分钟,观察。于1分钟内呈2+及以上凝集现象为阳性,1分钟内呈现2+以下凝集现象为阴性。

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