多语言展示
当前在线:118今日阅读:61今日分享:18

病毒灭活试验的准备工作有哪些?

病毒是可引发疾病的微生物,比细菌小,由蛋白质外壳、包膜和含有DNA或RNA的内核构成,病毒依靠活细胞实现自我复制。而宣称能消毒的各式空气净化器、消毒器械、消毒剂及具有抗病毒功效的口罩、纺织品等产品或材料,是否能够达标消毒或抗毒的标准,无一不需要经过病毒灭活试验。本文特此探讨中科检测实验室是如何进行病毒灭活试验的。
病毒灭活试验的器材
1

试验用病毒与细胞: 试验用病毒株,脊髓灰质炎病毒1型(poliovirus-Ⅰ ,PV-Ⅰ)疫苗株、艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)美国株。宿主细胞,可采用VERO细胞系、BGM细胞、Hela细胞系或FL细胞系,作为PV-1的测试细胞。用含有人T淋巴细胞白血病病毒Ⅰ型( human T cell leukemiavirus 1,HTLV-1)基因的人淋巴细胞(MT4株)作为HIV-1的测试细胞。

病毒灭活试验的病毒悬液制备
1

从液氮中取出冻存的试验用宿主细胞,在37℃温水中迅速融化,用毛细吸管移植于含有细胞维持液的细胞管内,吹吸数次,使混匀,立即离心(3000r/min,3min),去上清液。再加入适当的细胞维持液,吹吸数次,使混匀,同上离心后,转种于加有10ml完全培养基的培养瓶中。逐日观察细胞生长情况,在细胞长满单层时,用于消毒试验。

2

取出低温冻存的试验病毒毒种,37℃水浴融化,用细胞维持液作10倍稀释,然后接种于已经长满单层细胞的细胞瓶内,置37℃温箱中,使与细胞吸附、生长。逐日观察病变,待3/4细胞出现病变时,收获病毒。

3

将含有病毒及宿主细胞的培养液,在冰浴条件下,用超声波(或反复冻融)破碎宿主细胞,释放病毒。然后,尽快离心(6000r/min,15min)去除沉淀(主要为细胞碎片),上清液即为所需的病毒悬液。按每管1.Oml分装于无菌离心管(1.5ml)中,取1支病毒悬液,按病毒滴度测定法,测定其病毒滴度。其余均冷冻保存于-80℃备用。

病毒灭活试验的滴度计算方法
1

终点稀释法病毒感染滴度的计算 以半数细胞感染剂量(TCID50)表示。TCID50的对数值计算公式如下。 TCID50对数值=病变率高于50%组稀释度的对数值+距离比例

2

噬斑法病毒感染滴度的计算 噬斑法病毒感染滴度,以噬斑形成单位数( pfu),简称噬斑数表示。计数方法同活菌培养计数技术。 每毫升测试样品中的病毒含量计算(pfu/ml)=平板平均噬斑数×稀释倍数

3

平均灭活对数值的计算 平均灭活对数值按下式计算:设阳性(病毒)对照组平均病毒感染滴度(TCID50或pfu)的为No,试验(消毒)组平均病毒感染滴度(TCI,50或pfu)为Nx。 平均灭活对数值= log No—log Nx

推荐信息