人间充质干细胞培养基实用操作

人间充质干细胞无血清培养基相关操作:人间充质干细胞复苏1.把人间充质干细胞培养基放入37°C水浴中预热; 2.从液氮中取出间充质干细胞迅速放入37°C水浴快速解冻(解冻后不要继续孵育细胞); 3.在超净台中加入5ml的人间充质干细胞培养基重悬细胞,1000rpm离心5min; 4.弃上清,加入5ml的人间充质干细胞完全培养基重悬细胞,转移到T-25细胞培养瓶中(带滤芯); 5.将培养瓶置于37℃,5%CO2的无菌培养箱中培养;6.第二天,用新鲜的人间充质干细胞完全培养基给细胞换液。人间充质干细胞传代培养1.在显微镜下观察细胞(细胞生长在人间充质干细胞培养基中,且是次传代),当细胞融合度超过80%时,即可传代培养;2.37℃水浴预热培养基;3.在超净台中,弃掉T-25细胞培养瓶中的培养基,加入2mlPBS清洗,再加入1ml0.25%胰酶-EDTA消化细胞;4.在显微镜下观察到细胞变圆,有细胞开始脱离瓶壁时,即可加入5ml人间充质干细胞完全培养基终止消化;5.用移液器轻轻吹打瓶壁上剩余的细胞,并轻轻吹打将细胞吹散;6.将细胞转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;7.弃上清,加入15-20ml的人间充质干细胞完全培养基重悬细胞后转入T-75细胞培养瓶中或按适当比例接种到T-25细胞培养瓶中(确保细胞贴壁后融合度在25-50%之间),细胞密度在1x104cells/cm2(2.5x105cells/T-25瓶),混合细胞悬液,确保细胞均匀分布;8.将培养瓶置于37°C,5%CO2的无菌培养箱中培养;9.每两天用新鲜、预热的人间充质干细胞完全培养基进行换液。人间充质干细胞冻存间充质干细胞冻存可用百恩维的“无DMSO无血清细胞冻存液',具体操作如下。1.细胞消化和计数,用胰酶对待冻存的细胞进行消化,并对细胞进行计数;2.1000rpm离心5分钟,去掉上清;3.根据细胞计数的情况,加入适量的冻存液,使细胞密度在1×106/ml左右(或根据自己希望达到的细胞密度);4.轻轻地重悬细胞(务必重悬均匀),将重悬的细胞按等份加入到灭菌的冻存管(需提前做好标记或者贴上标签)中,旋紧冻存管盖;5.将冻存管放入冻存盒中,然后将冻存盒直接放入-80℃;6.第二天将细胞从-80℃转移到液氮中。