无创DNA产前检测：[3]常见问题解答

1 、 为什么开始一段序列的信号很杂乱，几乎难以辨别?　　这主要是因为残存的染料单体造成的干扰峰所致，该干扰峰和正常序列峰重叠在一起;另外，测序电泳开始阶段电压有一个稳定期，所以经常有20-50 bp 的紧接着引物的片段读不清楚，有时甚至更长。　　2 、 为什么在序列的末端容易产生 N 值，峰图较杂?　　由于测序反应的信号是逐渐减弱的，所以序列末端的信号会很弱，峰图自然就会杂乱，加上测序胶的分辨率问题，如果碱基分不开，就会产生 N 值，正常情况下ABI377测序仪能正确读出500个碱基的有效序列。　　3 、 测序结果怎么找不到我的引物序列?　　如果找不到测序所用的引物序列。这是正常的，因为引物本身是不被标记的，所以在测序报告中是找不到的;如果找不到克隆片段中的扩增引物，可能是您克隆的酶切位点距离您的测序引物太近，开始一段序列很杂，几乎难以辨别，有可能看不清或看不到扩增引物;另外插入片段的插入方向如果是反的，此时需找引物的互补序列。　　4 、 测序结果怎么看不到我克隆的酶切位点?　　可能的原因同上，您克隆的酶切位点距离您的测序引物太近，开始一段序列很杂，几乎难以辨别，有可能看不清或看不到酶切位点。通常我们会尽量选择距离酶切位点远点的引物，当然，若是样品出现意外原因，如空载、载体自连等，克隆的酶切位点也是看不到的。　　5 、 你测出的结果与我预想的不一致，给我的结果与我需要的序列有差距，这是怎么回事?　　首先，我们会核实给您的测序结果是否对应您的样品编号，如果对应的是您的样品，由于不知您的实验背景，测得的序列是否与您预想的结果一致我们无法判断，我们能做到的是检查发送给您的测序结果和您提供来的样品是否一致。　　6 、 序列图为什么会有背景噪音(杂带)?是否会影响测序结果?　　序列图的背景杂带是由荧光染料引起，如果太强会影响测序结果，要看信噪比，我们给的结果信噪比大都在98%以上。