超敏ECL发光液使用步骤
操作步骤
1
常规电泳、转膜、HRP 标记抗体或核酸探针孵育、洗膜。以下操作在室温进行。
2
新鲜配制发光工作液。将BufferA 和Buffer B 按1:1 比率混合,制成发光工作液(每25px2膜需要0.125ml 发光工作液)。转移到清洁的塑料小盒中。
3
用镊子将漂洗过的膜取出,将膜的下缘与滤纸轻轻接触以除去膜上多余的洗液,但勿使膜完全干燥。将膜转移至有发光工作液的塑料小盒中,使其完全浸泡,轻轻摇晃,室温孵育几十秒到1 分钟。
4
用镊子将膜夹起5-10 秒,并将膜的下缘与滤纸轻轻接触以除去膜上多余的发光液,迅速将膜完全包裹于洁净保鲜膜内,去除气泡和褶皱,蛋白面朝上固定于X 片暗盒内。
5
在黑暗中一次重叠放入3 张X 光胶片,30 分钟或更长时间后全部取出显影。
6
对同一张膜进行多次蛋白杂交:用PBST 或TBST 洗涤掉发光液(10min×3 次),然后从开始一抗杂交即可。
注意事项
1
优化一抗和二抗的比例
2
选择高质量的膜
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