开始定氮仪
一． 适用范围：本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。不能直接区别试样中的蛋白氮和非蛋白氮。二． 原理：各种饲料的有机物质在还原性催化剂（硫酸铜：硫酸钾=1:15）的作用下，用浓硫酸进行消化作用，使蛋白质及其它有机态氮（在一定处理下液包括硝酸态氮）部转变成氨离子并与硫酸化合成硫酸铵；而非含氮物质则以二氧化碳、水蒸汽、二氧化硫状态逸出。消化液放在浓碱的作用下进行蒸馏，释放出的铵态氮用硼酸溶液吸收，并与之结合成为四硼酸铵，然后以甲基红溴甲酚绿混合作指示剂，用盐酸标准溶液（0.05mol/L）滴定，求出氮的含量，根据不同的饲料再乘以一定的系数（通常用6.25系数计算），即为粗蛋白质的含量。本法不能区别蛋白氮和非蛋白氮，只能部分回收硝酸盐和亚硝酸盐等含氮化合物。在测定结果中除蛋白质外，还有氨基酸、酰胺、铵盐和部分硝酸盐、亚硝酸盐等，故以粗蛋白质表示之。三． 试剂和溶液：本方法除特殊注明外，试剂均为分析纯，水均为蒸馏水。1. 硫酸：含量为98%，无氮。2. 混合催化剂：硫酸铜（5各结晶水）：硫酸钾=1:15粉碎过40目混匀。3. 氢氧化钠：400g/L溶液。4. 硼酸：20g/L溶液。5. 混合指示剂：甲基红1g/L乙醇溶液；溴甲酚绿5g/L乙醇溶液。两溶液等体积混合，在阴凉处保存期半个月。6. 盐酸标准溶液：0.05mol/L盐酸标准溶液：取4.2ml盐酸，用蒸馏水定容至1000ml。7. 蔗糖。8. 硫酸铵：干燥（105℃干燥2小时）。四．仪器设备：1.实验室用样品粉碎机或研钵。2.分析筛：孔径0.45mm（40目）。3.分析天平：感量0.0001g。4.消煮炉。5.滴定管：酸式10ml、25ml。6.凯氏蒸馏装置：半微量水蒸汽蒸馏式。7.锥形瓶：150ml。8.容量瓶：100ml。五．试样的选取与制备： 选取具有代表性的试样用四分法缩减至50g，粉碎后全部通过40目筛。六．测定步骤： 1、试样的消煮称取试样0.45g，准确至0.0002g，无损的放入预先加入6.4g混合催化剂的消煮管中，混合均匀，再加入12ml硫酸和2粒玻璃珠，将消煮管放入消煮炉中加热，温度控制在420℃，当溶液呈透明的蓝色时，再继续加热2.5小时。 2、转移定容 消煮完全后，将消煮管取出，待消煮液完全呈透明的蓝色时，先用蒸馏水少量多次冲洗弯颈漏斗及消煮管口，用腕力摇动消煮管，然倒入100ml容量瓶内，用少量蒸馏水多次冲洗消煮管及用于转移的漏斗内外壁，，待冷却后，定容至刻度，作为试样分解液。 3、氨的蒸馏：半微量蒸馏法 将蒸汽发生器内加入2⁄3位置蒸馏水及玻璃珠或炉渣、4ml左右浓硫酸和几滴0.1℅甲基红指示剂，使呈红色，提供酸性环境。向反应室内注入适量的蒸馏水，封闭反应室进液处和废液室出液处铁夹，待蒸馏瓶内液体将要沸腾时，打开冷凝管端接的自来水龙头，当冷凝管末端流出水开始蒸馏，先用待测定液润洗移液管，再准确移取试样分解液5ml注入反应室中，用20ml硼酸吸收液在冷凝管末端吸收（液面下吸收），再加10ml氢氧化钠入反应室，用少量水冲洗进样入口，并用水封住进液口，防止漏气，待硼酸吸收液完全呈蓝色时，计时4分钟后，离开液面再蒸馏1分钟，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。 4、滴定： 取下蒸馏后的吸收液立即用0.05mol⁄L盐酸标准溶液滴定由蓝绿色变为灰红色终点。 5、空白测定： 称取蔗糖0.45g代替试样进行空白测定。七、测定结果计算： 1、计算： 粗蛋白=式中V2——滴定试样时所需盐酸标准溶液体积（ml）； V1——滴定空白时所需盐酸标准溶液体积（ml）； C——盐酸标准溶液的浓度（mol⁄L）； M——试样的质量（g）； V——试样分解液体积（ml）； 0.0140——与1.00ml盐酸标准溶液[c（HCL）=1.00mol/L]相当的、以克表示的氮的质量6.25——氮换算成蛋白质的平，均系数 2、重复性：每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。 当粗蛋白质含量在25%以上时，允许相对偏差为1%；当粗蛋白质含量在10%-25%之间时，允许相对偏差为2%，当粗蛋白质含量在10%以下时，允许相对偏差为3%。八、蒸馏步骤的检查： 精确称取0.2g干燥的硫酸铵代替试样，按半微量蒸馏法进行蒸馏，测得硫酸铵含量应为21.19±0.2%，否则应检查装置的气密性及加碱、滴定各步骤是否正确。