构建完成的质粒导入受体菌中扩增
工具/原料
1
目的质粒,感受态空载体菌
2
冰盒,水浴锅,秒表,恒温培养下,固体培养皿等
方法/步骤
1
冰浴:将质粒和载体按照1:1的体积进行混合,放在冰盒上冰浴15min,用秒表计时;
2
热激:冰浴完成后,将上述混合体系放在50摄氏度的水浴锅中进行热激,热激时间一般是1min,应该严格把握热激时间;
3
冰浴:热激完成后,将体系转到冰盒上,继续冰浴3min;
4
转移:上步冰浴完成后,将混合体系中加入10倍体积的soc media,在37度培养箱中培养45min;
5
涂布:将上述体系涂布到培养基上,37度条件下,12h。
注意事项
1
注意1:热激时间不应过长,否则对实验产生不必要的影响;
2
注意2:培养条件应该在37度,即细胞最适生长温度。
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