转速可以达到13，000 rpm的传统台式离心机
乙醇，氯仿，一次性注射器，研钵
RNAmisi microRNA快速提取试剂盒1个
动物组织（例如鼠肝脑）a. 新鲜组织用解剖刀迅速切成小碎块,根据处理组织的质量，按照50-100mg加入1ml的比例加入Lysis/Binding buffer后电动或者手动彻底匀浆。或者在液氮中研磨组织成细粉后，取适量组织细粉（约50-100mg）转入装有1ml Lysis/Binding buffer的1.5ml离心管中,剧烈吹打涡旋混匀。b. 可选,一般不需要：如果处理量大,有明显颗粒或者不溶物,非常粘稠或者裂解不充分, 可立即用带针头的一次性 5 ml(约0.9mm针头) 注射器抽打裂解物 10 次或直到得到满意匀浆结果(或者电动匀浆30秒),可以剪切DNA,降低粘稠度和提高产量。接操作步骤项下3。
室温放置5分钟以充分分离核酸蛋白复合物。
加入200μl 氯仿，剧烈振荡15秒。
室温放置2-3分钟，13，000rpm离心10分钟。
小心取上清（约600μl）转入到新的离心管，加入1.5倍体积的无水乙醇（必须是室温的，通常900μl），涡旋混匀。此时可能出现沉淀,但是不影响提取过程,立即吹打混匀,不要离心，立刻接下步。
将混合物(每次小于700μl，多可以分两次加入)加入一个吸附柱RA中，（吸附柱放入收集管中）12,000 rpm离心30-60秒，弃掉废液。
加700μl Wash Solution 1（请先检查是否已加入无水乙醇!），12，000rpm 离心30秒，弃掉废液。
加入500μl Wash Solution 2/3（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000 rpm 离心30秒，弃掉废液。加入500μl Wash Solution 2/3,重复一遍。
将吸附柱RA放回空收集管中，13,000 rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
取出吸附柱RA，放入一个RNase free离心管中，根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加30-50μl RNase free water（事先在 100℃水浴中预热效果更好）， 室温放置1分钟，12,000 rpm 离心1分钟。
如果预期RNA产量>30μg,加30-50μl RNase free water重复步骤11, 合并两次洗脱液,或者使用第一次的洗脱液加回到吸附柱重复步骤一遍(如果需要RNA浓度高)。洗脱两遍的RNA洗脱液浓度高, 分两次洗脱合并洗脱液的RNA产量比前者高1 5–30%, 但是浓度要低,用户根据需要选择。
附：microRNA富集方法（仅仅提取microRNA，不包含>200 nt其它总RNA成份。）1. 按照前面标准操作步骤1－5操作，直到得到上清。2. 较精确估计上清体积（约600μl），加入等体积70％乙醇（请先检查是否已加入无水乙醇!）（必须是室温的），涡旋或者吹打充分混匀，不要离心。3. 将混合物加入一个吸附柱RA中，（吸附柱放入收集管中）12,000 rpm离心30-60秒，收集滤过物。将滤过物从收集管转移到一个新的离心管后，把吸附柱子放回空的收集管内，再加入剩下的混合物，离心，收集滤过物。合并两次滤过物，计算体积。此时，滤过物含有microRNA, 吸附柱子上面是除去了microRNA的总RNA（不包含microRNA），如果需要，可以按照前面标准操作步骤8－11操作漂洗，洗脱回收得到去除了microRNA的总RNA。4. 较精确估计滤过物体积，加入0.65倍体积无水乙醇（必须是室温的），涡旋或者吹打充分混匀，不要离心。5. 取一套新的microRNA吸附柱MA，将上一步骤混合物(每次小于700μl,多可以分两次加入)加入microRNA吸附柱MA中，（吸附柱放入收集管中）12,000 rpm离心30秒，弃掉废液。6. 按照前面标准操作步骤8－11操作漂洗，洗脱得到富集的microRNA。注意：不同的实验可以选择不同的方法，例如Northern Blot或者表达芯片谱分析可以选择提取包括microRNA的总RNA。富集方法提取的microRNA因为去除了较大片段的mRNA和rRNA等，可能减少某些下游试验的扩增背景，当背景较高或者非特异扩增较多时，可以尝试使用富集方法提取的microRNA。
Wash Solution 1和Wash Solution 2/3加入无水乙醇后，可以在常温保存。
Wash Solution 2/3可能加入乙醇使用几天后出现沉淀晶体，并不影响使用，直接不吸晶体，吸上清使用就可以。
运输在常温下进行，不影响使用效果。
避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。