BLAST工具基因序列的生物信息学分析方法

首先，使用NCBI对序列进行同源性比对和相似性分析，使用软件DNAMAN 5.0和DNAsist 20对cDNA序列进行分析得到氨基酸序列。

然后，并推断分子量，采用DNAMAN 5.0 软件进行氨基酸序列比对，使用SeaView,以邻位相连法构建系统进化树。

然后，将标准质粒用双蒸水稀释成1010~10? copies/uL 的9个梯度，选取107、100、105、104、103、10这6个梯度作为模板，以IRF3F3和IRF3R3(表1)为特异引物，进行荧光定量PCR反应，每个反应设置3个重复。

然后，反应在Chromo4Real-Time Detection System (MJ Research)上进行，实验操作根据Green Two-Step qRT-PCR SuperMix荧光定量PCR试剂盒说明进行，反应体系为20 μL。

最后，反应程序为: 95°C预变性30 s; 95C变性5 s; 57°C退火15s, 72°C延伸15s,共45个循环; 55°C 30s,每30s升温0.5'C,共进行81个循环达到95°C。反应结束后对扩增曲线和熔解曲线进行分析，制作标准曲线。