微量移液器、96孔微型血凝反应板、微量振荡器、、加样槽、微量移液器枪头
新城疫标准抗原、pbs(磷酸盐缓冲液)、1%鸡红细胞悬液 新城疫标准抗原、阳性血清、阴性血清与待检血清 1%鸡红细胞悬液 四单位抗原
1%红细胞的配制:.为避免有些鸡只的红细胞有自凝现象,因此配制1%红细胞悬液时应最好选择采取3只SPF鸡或未进行过任何免疫过的成年公鸡血液。(抗凝剂与血液比例为1:4)2.采血完毕后将血加入至10ml离心管中,加3-4倍体积生理盐水以2000~3000r/min,5~10min离心3-5次。3.弃去上液和红细胞上层的白细胞薄膜,再加入十倍以上血量的PBS液,上下缓慢颠倒(切忌用力过大使红细胞破裂),使其充分混匀,再离心弃去上清液,反复几次直至上清液清亮透明为止。
取96孔微型血凝反应板,用微量移液器吸取pbs25ul,从第一孔加到第十二孔,每孔25ul。吸取25ul新城疫标准抗原加入第一孔,进行吹打3—5次,充分混匀后,从第一孔吸出25ul,加入第二空再次吹打3—5次,充分混匀后在从第二孔吸出25ul加入第三孔混匀,以此类推,一直倍比稀释至第十一孔。吸取25ulpbs从第十二孔倒加至第一孔且要悬加。
吸取25ul1%鸡红细胞悬液从第十二孔倒加至第一孔且要悬加。之后放在微量移液器上震荡混匀。在室温(20摄氏度—25摄氏度)下静置40min。读数得到结果
取96孔微型血凝反应板、用微量移液器吸取pbs 25ul,从第一孔加至第十一孔,第十二孔加入50ul.接着吸取待检血清25ul加入第一孔吹打3-5次,混合后从第一孔中吸出25ul加入第二孔,吹打3-5次,混匀后再从第二空中吸出25ul吹打3-5次,以此类推倍比稀释到第十一孔。
吸取25ul四单位病毒,从第十一孔倒加至第一孔,(悬加),然后轻叩反应板,室温下静置30min,最后加入红细胞也是倒加悬加,轻晃反应板,室温下静置40min,然后进行读数。
实验人员作好记录,清理台面,医疗垃圾分开处理,进行消毒。
加入抗原时是进行倍比稀释
第二次加入pbs时必须倒加与悬加(尽量使枪头不要碰到液面)
枪头吸取不同的液体必须更换一次
本实验对温度、时间、和试剂本身要求极为严格,所以要特别注意