通过核酸染料PI标记DNA,并由流式细胞仪进行分析,可得到细胞各个时期的分布状态,计算出G0/G1%,S%及G2/M/%,由此可以了解细胞的增殖能力,在抗肿瘤研究中,S期细胞比率通常作为判断肿瘤增殖状态的指标。
工具/原料
1
PI染液 PBS 胰酶 DMEM
2
流式细胞仪 离心机
方法/步骤
1
收集6孔板中的培养液于离心管中,1000rpm/min,离心10分钟,真空泵抽走上清液。
3
逐滴加入5ml或更多预冷的70-80%的乙醇,涡旋以混匀细胞, 4°C避光过夜(>18小时)。若长期保存,将固定的细胞放于-20°C.
4
1000-1500rpm/min, 离心细胞10分钟,弃上清。之后清洗细胞2次以去除所有的乙醇。注:第一次用1x PBS,第二次用染色液。
5
5. 细胞染色:每管样本需10^6细胞。具体操作如下:A. 对于PI/RNase 染色,将细胞重悬于0.5 mL PI/RNase 染色液。B 对于7-AAD染色,将细胞重悬于0.1 mL 染色液,同时加入20 μL7-AAD染色液。
6
室温避光孵育15分钟。
7
分析前4°C避光保存样本,1小时之内上流式细胞仪检测。
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