最近小编收到很多问题，其中一个就是下面小编为大家整理一下关于TRAF基因和TAK基因的克隆方法的步骤，希望这些方法能够帮助到大家。
方法/步骤
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首先，在根据GenBank中已提交的鱼类TRAF6 和TAKI cDNA序列的保守区设计兼并引物(TRAF6-F/TRAF6 R; TAKI- F/TAK1-R)。
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然后，扩增TRAF6和TAKI基因的核心片段。PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测后，与PMD18-T (TaKaRa, Japan)载体连接，转人trans5a感受态细胞中，筛选阳性克隆进行测序。
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然后，通过BLAST 比对分析后获得TRAF6和TAKI基因的核心片段，根据得到的核心片段设计RACE特异性引物(表1),利用巢式PCR扩增TRAF6和TAKI基因的5'和3'末端。
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然后，在电泳检测目的片段后，连接到载体，转化trans5a感受态细胞，筛选阳性克隆送测序。BLAST分析测序结果，Seqman软件拼接得到的序列，最终获得半滑舌鳎TRAF6和TAKI基因全序列。
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然后，进行序列比对和系统进化分析，利用EditSeq软件预测TRAF6和TAKI基因的开放阅读框(ORF)及可能编码的氨基酸序列。
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最后，预测和分析蛋白结构城，在NCBI数据库中搜寻其他物种的TRAF6和TAKI的氨基酸序列，利用MEGAS.O软件，以Neighbor jining法构建系统进化树。
注意事项
上述方法为小编整理所得，希望能够帮助到大家。
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