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10XGenomics单细胞转录组信息分析到底有多难?

10x Genomics的Chromium Controller是基于微流控技术的单细胞文库制备系统,可以同时获 得1,000-80,000以上的单细胞,制备文库和Illumina平台兼容,通过测序实现对高通量单细胞数据 进行细胞群体的分类以及细胞群体间基因表达的差异分析。10x Genomics单细胞表达分析可应用的细胞类型众多,如肿瘤细胞、免疫细胞、干细胞、神经细胞、生殖细胞、胚胎细胞等。是研究肿瘤异质性,免疫细胞群体和胚胎发育的优秀方法。在进行单细胞研究,获得高质量的单细胞转录组信息分析是研究成功的重要一步。
方法/步骤
1

Illumina平台测序所得原始下机序列(Raw Reads),通过去低质量序列、去接头污染等过程完成数据处理得到高质量的序列(Clean Reads),后续所有分析都是基于Clean Reads。

3

分析内容 标准信息分析 (需提供参考基因序列、参考基因组序列及基因注释结果) 1.测序数据统计与评估:各个样本测序数据基本质控(reads数、测序饱和度等)、各个样本数据比对(细胞数目统计、reads基因组比对率等)、基因表达定量 2.单细胞亚群分类与分类结果可视化:细胞过滤、细胞亚群分类、分类结果可视化(TSNE图) 3.亚群上调表达基因分析:上调表达基因筛选、上调表达基因基因GO/KEGG功能富集分析 4.标记基因筛选以及调控网络分析:标记基因筛选、各标记基因在群体中的表达分布、标记基因蛋白质互作网络分析  高级信息分析:拟时分析 个性化分析:已知标记基因表达分布、多样本亚群间比较、Reactome和DO功能富集分析

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