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小鼠脑神经元原代培养经验

通过大量的小鼠的脑神经元的培养,积累了丰富的培养经验,以及对于其中的难点有了自己的一些见解。希望能够为各位提供一定的参考价值。
工具/原料

解剖工具,木瓜蛋白酶,neurobasal基础培养基,谷氨酰胺,B-27添加剂,及相应的细胞培养所需的条件和培养皿等

方法/步骤
1

首先,在需要进去小鼠的脑部神经元培养时,你首先的先指导自己想要获得的是什么类型的神经元细胞,在脑部分区中那个部位大量存在你所需的神经元细胞,可以通过查阅文献或者是通过自己的额实验目的进行,或者你可能需要的是其他神经元,如背根神经元(DRG)这一类的。

2

在前提1 的基础上必须进行实验方案的拟定,最终定制出适应的实验方案,再通过实验之后进行修正。这里需要提一下,不是所有的实验都会是一帆风顺的,多做多想多调。方案确定之后需要的进行实验耗材的准备,古语说的好,工欲善其器,必先利其器。如果不想让每一次的实验因为物品耗材的准备不足而失败,请做好准备。

3

开始进行实验,便是解剖,这里依旧有一份资料可以赠送,便于一份3D 的小鼠脑部结构及不同部位名称可以赠送。解剖的详细资料依旧如上,或者自己多尝试,也刚好练手

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在个人的观点中,脑部原代培养的关键在消化以及如何分离出你想要的特定细胞,这是整个脑部原代培养的难点。消化方式的选择,最强暴的胰酶短时间消化,但是此法时间不好把握,容易导致细胞活力不佳及大量的死细胞,且会影响所分离出来的神经元状态。木瓜蛋白酶或许是一个不错选择,也可自主进行尝试,如木瓜蛋白酶+胶原酶的组合或许也有不一样的效果。

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特定神经元的分离可以选用密度梯度离心的方法进行尝试,也可以培养免疫吸附来达到自己的目的,这些方法不是一个标准的,需要先自己查阅资料之后进行尝试,免疫吸附的marker选择也尤其的重要,其会直接影响所分离的效果以及后续的细胞状态。

6

最后的问题便是培养的问题。培养过程中状态的判定以及能够分离培养是否成功都是值得注意。以及培养方面的小细节具体如何都是可以尝试的。

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