蛋白印迹是很多的试验器器材中常见的器材之一，很多的需求者想买到便宜的，那么下面介绍一下蛋白印迹的使用注意事项有哪些：
方法/步骤
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使用化学发光检测时，试剂须按需要量临用前配置混合。
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一般情况使用0.45μm的NC膜，0.1～0.2μm的小孔径膜只适合于分子量小于20kD的蛋白质。
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如果出现非特异性的高背景，可观察仅用二抗单独处理转印膜所产生的背景强度，若高背景确由二抗产生，可适当降低二抗浓度或缩短二抗孵育时间;并考虑延长每一步的清洗时间。
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一抗与二抗的稀释度、作用时间和温度对检测不同的蛋白要求不同，须经预实验确定最佳条件。
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滤纸/凝胶/转印膜/滤纸夹层组合中不能存在气泡，可用玻璃棒在夹层组合上滚动将气泡赶出，以提高转膜效率;上下两层滤纸不能过大，避免导致直接接触而引起短路。
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PVDF尼龙膜较NC膜柔软、结实、灵敏度高，易于操作且蛋白质结合能力强(PVDF膜可结合蛋白质480μg/cm2，而NC膜只能结合蛋白质80μg /cm2);缺点是PVDF尼龙膜背景也高，需要加强封闭;此外，PVDF尼龙膜若在使用前先行甲醇处理5～10s，以活化膜表面的正电基团，使它更容易与带负电的蛋白质结合，可提高蛋白质在膜上的保留指数。
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如果反应灵敏度不高，可增加凝胶的厚度到1.5mm(厚度超过2.0mm时，凝胶转移效率受限);也可在电泳条带不发生变形的前提下，尽量提高蛋白样品的上样量。忆立赋一站式采购平台，正品保证，限时折扣。
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