有的小伙伴需要大量的质检抗体,或者大规模筛选单克隆抗体。免疫印迹需要大规模的去做,如何才能提高WB的速度。
工具/原料
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蛋白质电泳;单克隆抗体;
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免疫印迹,转膜;
方法/步骤
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大规模的质检抗体,速度要快,WB的操作流程熟练是关键。WB的各个环节一个也不能少,但是我们可以通过分解的方式来将一次WB 实验分解为两次,从而缩短每次实验时间。
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具体的操作方法:比如需要质检的抗体与小鼠(或者其他物种)的某种蛋白质反应;而这种蛋白质在不同的组织器官中的含量不同,可以提前将PAGE胶跑好,并进行转膜,转膜完成后进行封闭,封闭结束可以将膜用自封袋密闭冻存与-20度。有需要质检的抗体时将膜取出再继续后续的实验。
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例如:可以将小鼠的肝脏、脾脏、肺脏、胃、心脏等器官,各自制成WB样品,跑一块胶并转膜,转膜完成后进行封闭冻存。当有大量抗体需要质检时在分别取出进项后续实验。这种方法也适用于单克隆抗体的筛选,因为单克隆筛选有时需要大量的细胞上清去检测是否能和目的蛋白有反应,这时就可提前跑胶转膜,当杂交瘤细胞产生上清时在做后续实验。
注意事项
细节很重要,WB一定要细心去做。