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餐饮食品中食源性致病菌的快速鉴定方法与流程

近年来我国食品安全频频出现问题,食品安全问题已经成为生活中不可不谈的话题。我国疾病预防控制中心相关资料表明,我国近年来由食源性致病菌引起的食品安全事件最为严重。中国最新一项食源性疾病主动监测显示,我国平均6.5人中就有1人次罹患食源性疾病。轻者多以急性胃肠炎症状出现,如呕吐、恶心、腹痛、腹泻、发烧等,经过治疗可以恢复健康;但重者可出现呼吸、循环、神经等系统症状,抢救及时可转危为安;如贻误时机还可危及生命,有的急性中毒,虽经千方百计治疗,但仍给中毒者留下后遗症。致病微生物引起的食品安全问题在我国屡见不鲜,一旦发生,对公众的健康危害是明确而广泛的。饮食模式的改变,例如对生鲜食品和未彻底加热食品的偏爱、从食品的加工至消费间隔时间的延长、不在家中进餐时尚的流行等均是微生物性食源性疾病发病率上升的原因。在这样的社会背景下,我国食源性致病菌检测链条的发展有着巨大的空间。快速而准确检测出被称为“头号杀手”的食品致病菌,是确保食品安全的首要任务。
方法/步骤
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食源性致病菌快速检测方法:主要有显色培养基法、电阻抗法、微热量法、免疫学方法及分子生物学检测方法等。

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餐饮食品中食源性致病菌的快速鉴定方法流程:2)引物筛选与反应体系优化选取金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、单增李斯特菌的特异基因nuc,invA,prfA,分别设计引物对。

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餐饮食品中食源性致病菌的快速鉴定方法流程:3)PCR扩增条件多重PCR反应体系模板DNA:三种致病菌各2μL;nuc上下游引物10μmol/L 1.25μL,invA上下游引物3μmol/L 1.25μL,prfA上下游引物10μmol/L 1.25μL;MultiplexPCRMix 2:25μL;MultiplexPCRMix 1:0.12μL;体系终体积50μL。PCR反应条件:94℃预变性10min;94℃变性30s,57℃退火30s,72℃延伸60s,进行30个循环;72℃延伸10min,4℃保存反应产物。

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餐饮食品中食源性致病菌的快速鉴定方法流程:4)对菌株DNA进行PCR-DHPLC检测只有与目标扩增吻合的菌株检测出扩增吸收峰,而其他非目标扩增菌均呈阴性。

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