流式细胞术(flow cytometry, FCM)是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分选的新技术。
方法/步骤
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1. 细胞培养:取对数生长期的细胞,按1×106cells/ mL以1mL接种24孔板或2mL接种于6孔板内,进行所需的处理(比如加入药物),特定时间后终止培养,进行下一步的实验。
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2. 细胞固定: 800rpm离心5min,收集细胞沉淀,弃上清,用预冷PBS洗涤两次,加入预冷75%乙醇,于4℃固定4h以上。
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3. 细胞染色:1500rpm离心5min,弃上清,以3mL的PBS洗涤一次,加入400uL溴化乙锭(PI,50ug/mL),100ul RNase A(100ug/mL ),4℃避光孵育30min。
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4. 流式分析: 以标准程序用流式细胞仪检测,一般计数2~3万个细胞,结果用细胞周期拟和软件ModFit分析。
注意事项
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CCAA试剂盒是基于PI染色(Propidium staining)方法进行细胞周期与细胞凋亡分析的试剂盒,操作简便
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engreen的CCAA试剂盒PI染液即开即用,无需再用缓冲液配制,误差小,不需要提前用RNA酶消化的超快型试剂盒,常用于贴壁或悬浮细胞的周期与凋亡检测
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