中和抗体概述和检测中和抗体的方法

中和抗体概述宿主对病毒感染的常规反应是产生抗体，与病毒结合而使其失活(中和)。通常IgG的中和作用比IgA强，HIV包膜是此种体液反应的主要靶点。与抗体中和作用相关的主要病毒蛋白位于包膜蛋白gp120和跨膜蛋白gp41的膜外部分。在一个对许多HIV-1MAb的分析中发现，抗gpl20抗体对B亚型有选择性反应活性，而抗gp41抗体具有较广的亚型活性。在这些研究中发现了五种中和免疫型涉及一系列病毒亚型，与基因型不一定相关。此外，已鉴定出一些具有广泛反应性的针对CD4结合位点表位的单克隆抗体，这些关于病毒多样性的信息为疫苗研发提供了重要的知识。现为高水平的抗病毒活性，而感染个体的血清并不总对同型毒株表现较强中和活性。在早期HIV-1感染PBMC的研究中发现这些抗体的滴度为1：1O到1：1000，在这些分析中提出至少有四种HIV-1血清型。中和敏感性的差异可能反映了对体液免疫反应的逃避，病毒对细胞受体的亲和力高于对抗病毒抗体的亲和力，或与检测中和抗体的方法不同。检测中和抗体的方法在很多早期中和抗体的研究中使用实验室分离毒株、T细胞系和来自感染者的血清。多数情况下，使用T细胞适应病毒和T细胞系比使用原代分离病毒和PBMC更容易观察到病毒中和作用。重要的是，要复制体内的情况，有必要使用同源的原始病毒分离株和正常PBMC来测量中和抗体。这些检测方法中的成分使这方法最接近开展具临床意义的体内HIV中和潜能的检测。目前尚未正式定义原始分离株，但它通常指PBMC中复制的不超过3代，且通常自最初分离出不超过2个月的病毒。一些研究者建议使用未刺激的PBMC进行中和实验，因为体内细胞可能是未活化的。鉴于未活化的细胞可以表达不同的病毒辅助受体，此种检测方法有待进一步研究。近来的检测中多采用重组病毒技术和单周期病毒检测法，能检测到更高水平的中和抗体。但这些分析的临床意义有待评估。例如，最近研究表明HIV包膜假病毒与有同样的包膜糖蛋白的感染性HIV分子表现出相似的中和敏感性。然而，在PBMC中培养感染性分子克隆的中和敏感性却下降，此结果可能表明，PBMC中培养的病毒表面的包膜蛋白增加。此观察表明，这些较快速的中和抗体检测明显具有临床意义。尽管如此，这些区别是定量的而不是定性的，包膜假病毒与HIV-1原始分离株的中和敏感性相似。重要的是，随着疾病进展，中和抗体可以被增强抗体所取代。最近，一些病毒和方法已被推荐用来检测中和抗体反应，尤其是由疫苗诱导的中和抗体。