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农杆菌的培养方法

在我们的日常生活中,往往会遇到农杆菌的培养方法的问题,常常会不知道怎么处理,下面就让小编为大家提供一下解决这种问题的方法,希望能够给大家提供一定的帮助。
方法/步骤
1

首先,从LB固体平板上.挑取含有目的基因的单菌落,接种到3 ml LB液体培养基中[ 含利福平(30 mg L)、卡那霉素(70mg/L)和四环素(6.5mg/L) ]于恒温揭床上,27C,以180 r/min 的转速振荡培养过夜,至AOC为0.6~0.8。

2

然后,摇培过夜的菌液按1%~2%的比例,转人新配置的无抗生素的LB培养基中,在与上述相同的条件下培养6 h左右A00=0.2~0.5时即可用于转化。或将按上述方法培养的Aoo=0.6~0.8 的菌液,转入无菌离心管中,于室温条件下,以5000 I/ min 的转速,离心10 min,弃去上清液,菌体用1/2 MS 液体(pH5.4~5.8)培养基重悬,稀释至A300=0.2 左右,用于转化。

4

然后进行共培养,将侵染后的烟草叶片接种在不含任何激素和抗生素的MS 基本培养基(T1)上,用封口膜封好培养皿,28C黑暗中培养2~~4 d。

5

然后,进行选择培养,将黑暗中共培养2~4 d的烟草叶片转移到筛选培养基(T2)中,用封口膜封好培养皿,在光照为2 000~10 000 lx.25~28'C.16/8 h(day/night) 光暗条件下选择培养, a 盘边缘轻压人培养基中,以增加选择压力。

6

最后,进行生根培养,约2~3 周后,待不定芽长到1cm 左右时,切下不定芽并转移到生根培养基,上进行生根培养,5~10 d后长出不定根后即可转移到土中培养。

注意事项

上述解决方法为小编所提供,希望能够帮到大家。

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