人骨髓MSCs成骨细胞及神经细胞诱导方法

骨髓间充质干细胞培养时成骨细胞及神经细胞的诱导分化具体的操作过程和操作方法。成软骨细胞的诱导1.选前三代生长良好的MSCs，消化后制成单细胞悬液；2.以3X10'/ml的密度接种于细胞瓶中；3.待细胞达到80-90%融合后，每隔三天换液一次，倒置显微镜下观察；4.14天后终止诱导；5.提取总RNA，设计II型前胶元的引物序列；6.COL(II)上游:5'-TTC AGC TAT GGA GAT GAC AAT C-3‘，下游:5-AGA GTC CTA GAG TGA CTGAG-3；7.产物片断4756p，进行RT-PCR扩增；8.其产物经琼脂糖凝胶电泳后观察，检测II型前胶元mRNA的表达。9.软骨细胞诱导液，DEME高糖培养液，10%胎牛血清，100u/ml青霉素，l00g/ml链霉素，TGF-P}10ng/ml，抗坏血酸50ug/mla。体外诱导MSCs向神经细胞分化1.取体外扩增至第2代的MScs2.以lx105/ml浓度接种于放置有消毒盖玻片的6孔板内，制备细胞爬片；3.l周后进行诱导，加10ng/1lllEGF+含10%FBs的培养液预诱导3d；4.lm oFLBME+含10%FBS的培养液预诱导ld；5.24h后加1nmol/mlJRA+含10%FBs的培养液进行诱导；6.诱导24h后密切观察，可见多数细胞形成明显的神经元样细胞形态，胞体呈圆形，突起较长，双极或多极形，在突起末端出现分支，部分相邻细胞的突起连接成网。