无水乙醇、1.5mL离心管、2.0mL离心管
BIOG cfRNA Enri Kit(吸附柱和收集管, 溶液E, 溶液Q ,裂解液, 析出液 ,洗涤液 ,洗脱液 ,消化液, RNA Carrier)
取出析出液和洗涤液,按以下操作a) 析出液:4.5mL加入25.5mL无水乙醇;9mL加入51mL无水乙醇。b) 洗涤液:9mL加入21mL无水乙醇;18mL加入42mL无水乙醇。c) 配制好的析出液及洗涤液如出现沉淀,可在37℃溶解,摇匀后使用
取2.0mL离心管1支,依次加入1mL血清/血浆样本、100μL溶液E、700μL溶液Q,上下颠倒混匀,室温/4℃静置20分钟。
12,000 rpm 4℃离心5分钟,弃上清,收集离心管内沉淀。
向沉淀中依次加入200μL裂解液、4μL RNA Carrier、及20μL消化液,漩涡震荡至沉淀完全分散,56℃水浴10 分钟。
加入500μL析出液,轻轻颠倒混匀,如有半透明悬浮物,不影响RNA的提取与后续实验。
将吸附柱放入收集管内,将上述溶液转入吸附柱内,静置2 min,12,000 rpm 4℃离心1 min,弃收集管内废液。
将吸附柱放回收集管内,加500μL 洗涤液至吸附柱内,12,000 rpm 4℃离心1 min,弃收集管内废液。
将吸附柱放回收集管内,12,000 rpm 4℃离心2 min,离去残留的洗涤液。
取出吸附柱,放入新的1.5 mL 离心管内,加入30-50 μL 洗脱液,静置3 min,12,000 rpm 4℃ 离心2 min,收集RNA溶液。提取的RNA即可用于下一步实验或-20℃保存。
裂解液、洗涤液含有刺激性化学物质,操作过程请做好防护措施,避免直接接触皮肤,防止吸入口鼻。如不慎沾染皮肤或眼睛,请立即用清水或生理盐水冲洗,必要时请就医。
消化液、RNA Carrier请于-20℃存放,避免反复冻融。