紫外可见分光光度计
一．适用范围：本方法适用于配合饲料和单一饲料。二．原理：将试样中的有机物破坏，使磷游离出来，在酸性溶液中，用钒钼酸铵处理，生成黄色的磷钒钼酸铵【（NH₄）₃PO₄NH₄VO₄-16MoO₃】，在波长420nm下进行比色测定。二．试剂与溶液：本方法所用试剂除特殊说明外，均为分析纯。水为蒸馏水或同等纯度的水。1. 盐酸溶液：1:1水溶液2. 硝酸。3. 高氯酸。4. 钒钼酸铵显色剂：称取偏钒酸铵1.25g，加水200ml加热溶解，加硝酸250ml，另称取钼酸铵25g，加水400ml加热溶解，在冷却的条件下，将两种溶液混合，倒入1000ml容量瓶，定容，再倒入棕色磨口瓶避光保存，若生成沉淀则不能继续使用。5. 磷标准液：将磷酸二氢钾在105℃干燥1小时，在干燥器中冷却后称取0.2195g置于小烧杯中，加入适量水溶解后，加硝酸3ml，转移至1000ml容量瓶中定容，摇匀，即为50μg/ml的磷标准液。四．仪器与设备：1.实验室用样品粉碎机或研钵。2.分样筛：孔径0.45mm（40目）。3.分析天平：分度值0.0001g。4.高温炉：可控制炉温在550±20℃。5.坩埚：瓷质，定容50ml。6.凯式烧瓶：150ml。7.可调小电炉：1000w。8.容量瓶：100ml、50ml。9.移液管：1ml、2ml、3ml、5ml、10ml。10.分光光度计：10mm比色皿，可在420nm波长下测定吸光度。11.量杯;10ml、20ml。五．试样的选取和制备：取具有代表性的试样，用四分法缩减至50g，粉碎至40目。一． 测定步骤：1. 试验的分解：⑴． 干法：用于有机物质。称取2.5g试样，准确至0.0002g，在电炉上小火炭化，在炭化过程中，应将试样在低温状态加热灼烧至无烟，再放入高温炉中于550±20℃下灼烧3小时，取出，在空气中冷却后，加入1:3的盐酸10ml和浓硝酸4滴，小火煮沸10分钟，冷却后将此溶液转入100ml容量瓶，定容，即为试样分解液。⑵． 湿法：用于无机物质。精确称取磷酸氢钙0.4g，其它试样称取1.0g于凯式烧瓶中，精确至0.0002g，加入浓硝酸10ml，高氯酸10ml，盖上弯颈漏斗，加热煮沸10分钟，冷却后加蒸馏水20ml，煮沸5分钟，驱逐二氧化氮，冷却后转入容量瓶，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，即为试样分解液。2. 标准曲线的绘制：准确移取磷标准液0、1.0、3.0、5.0、7.0、9.0、11.0、13.0ml于50ml容量瓶中，各加入钒钼酸铵显色剂10ml，用水稀释至刻度，摇匀，常温下放置10分钟，以0ml溶液为参比，用10ml比色皿，在420nm波长下，用分光光度计测定各溶液的浓度（或吸光度），打印机会打印出一条回归曲线的截距N和斜率M，以及相关系数R，（或以磷含量为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线）。3. 试样的测定：准确移取试样分解液1ml于50ml容量瓶中，加入钒钼酸铵显色剂10ml，按六、2方法显色和比色测定。测得试样分解液的浓度值（或吸光度值），直接代入公式计算（或用标准曲线查的试样分解液的含磷量后代入公式计算）。七、测定结果的计算和表达：1.计算：P（%）=(C- C₁)/2m式中：C—试样分解液的浓度值。 C₁--空白溶液的浓度值。 m—试样的质量。或：P%=X/100Mv式中：m—试样的质量，g。X—由标准曲线查得试样分解液总磷含量（μg）。V—移取试样分解液体积（ml）。2.允许差：每个试样称取两个平行样进行测定，以其算术平均值为测定结果。磷含量小于0.5%时，允许相对偏差为10%，磷含量大于0.5%时，允许相对偏差为3%。