多语言展示
当前在线:266今日阅读:99今日分享:20

酵母小范围接合方法及接合子的筛选

最近小编收到很多问题,其中一个就是下面小编为大家整理一下关于酵母小范围接合方法及接合子的筛选的步骤,希望这些方法能够帮助到大家。
方法/步骤
1

首先,当转化子单菌落长至直径0.5~1mL时,每种类型酵母靶菌株挑取一个单菌落克隆子用来做接合实验。

2

然后,将挑取的多种单菌落克隆子加入到含有0.5mL 2XYPDA液体培养基的PA瓶中,旋转混匀以打算单菌落。

3

然后,在28~30C恒温条件下,在100r/min进行振荡培养12~24h。

4

然后,将菌液转移至1.5mL.离心管中,在12000r/min的条件下室温离心15s,弃上清,以1mL ddH2O重悬细胞,用微量移液器轻柔吹吸混匀。

5

然后,各取100PL 菌液涂于SD选择营养缺陷型/ 异亮氨酸-色氨酸(SD/-Leu-Trp)及选择营养缺陷型-色氨酸-异亮氨酸-组氨酸-腺嘌呤(SD/-Trp-His-Leu-Ade)培养基平板上,30C恒温正置培养3~5d。

6

最后,SD/ -Trp-His-Leu-Ade培养基平板上得到的即为具有相互作用蛋白的接合子。

注意事项

上述方法为小编整理所得,希望能够帮助到大家。

推荐信息