很多从事抗体制备的朋友往往会遇到这样的麻烦，要做与某个真核蛋白反应的抗体，因为这种真核蛋白（哺乳动物细胞表达）市场上没有（全部为原核蛋白），只能拿大肠杆菌表达的蛋白进行免疫，这样就导致一种结果，大肠杆菌表达的蛋白和真核蛋白在结构上有较大的差异，那么我们得到的抗体如何才能和这种自然状态下的原始蛋白发生反应呢，曾样才能提高抗体的发应率呢
工具/原料
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原核免疫制作的单抗与真核蛋白发生反应
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原核蛋白和真核蛋白之间的结构存在较大的差异
方法/步骤
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若要与所做抗体发生反应的是病毒（病毒只能在活的细胞内复制，相当于真核表达的蛋白；很多时候用纯化的病毒作为免疫原不能使动物产生有效的免疫反应）：方法：1、将小鼠大肠杆菌表达的蛋白进行免疫，2-3次免疫后，用纯化的病毒做包被检测效价，待效价达到融合要求时（效价10000以上）再做融合，此事和病毒反应的抗体都是能和真核蛋白（病毒粒子）发生有效反应的抗体。2、细胞融合后要进行筛选，此时也要用纯化后的病毒作为包被抗原，当然前提是你做好预实验选好病毒的包被量，不然你是筛选不到我们需要的目的抗体的。
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若要与所做的抗体发生反应的是哺乳动物等真核生物的蛋白（此蛋白买不到真核表达产品，或纯化真核蛋白产品成本巨大）方法：1、将大肠杆菌表达蛋白和酵母表达蛋白（虽然也是真核蛋白但与天然的蛋白还有些差异）混合后乳化免疫小鼠，免疫结束后进行细胞融合。若该蛋白有哺乳动物细胞系表达产物（该细胞系表达蛋白可以不提纯）也可与原核蛋白混合免疫，将大大提高抗体与真核蛋白反应率。2、将筛选到的抗体进行western-blot检测，western-blot不能做出的已经基本确定他与真核蛋白不会发生反应了，可以直接丢掉，将有反应的抗体留下做进一步的验证。
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希望这些对大家有帮助
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