吸附柱和收集管, 结合液 ,裂解液 ,
析出液, 洗涤液 ,洗脱液, 消化液,
1. 请自行准备:无水乙醇、PBS、1.5ml 离心管。2. 取出析出液和洗涤液,按以下操作:a) 析出液:4.5mL 加入 25.5mL 无水乙醇;9mL 加入 51mL 无水乙醇。b) 洗涤液:9mL 加入 21mL 无水乙醇;18mL 加入 42mL 无水乙醇。c) 配制好的析出液如出现沉淀,可在 37℃溶解,摇匀后使用。
1. 取 1.5ml 离心管,加入 1mL 结合液,取干血斑样本(5-9 片 5mm*5mm/片)至离心管中,将离心管置于摇床上,转速 500-600 转/分, 室温,摇动 10 分钟;取出滤纸,5,000 rpm 离心 3 分钟。2. 彻底弃上清,加入 100μLPBS,悬浮沉淀;加入 200 μL 裂解液,20μL 消化液,充分振荡混匀,56℃水浴 10 分钟至细胞完全裂解。3. 加入 500μL 析出液,轻轻颠倒混匀,如有半透明悬浮物,不影响DNA 的提取与后续实验。
1. 将吸附柱放入收集管内,将上述溶液转入吸附柱内,静置 2 分钟,12,000 rpm 离心 1 分钟,弃收集管内废液。2. 将吸附柱放回收集管内,加 500 μL 洗涤液至吸附柱内,12,000 rpm 离心 1 分钟,弃收集管内废液。3. 将吸附柱放回收集管内,12,000 rpm 离心 2 分钟,离去残留的洗涤液。4. 取出吸附柱,放入新的 1.5 mL 离心管内,加入 50-200 μL 洗脱液,静置 3 分钟,12,000 rpm 4℃ 离心 2 分钟,收集DNA 溶液。提的DNA 即可用于下一步实验或-20℃保存。
1、 析出液、洗涤液含有刺激性化学物质,操作过程请做好防护措施,避免直接接触皮肤,防止吸入口鼻。如不慎沾染皮肤或眼睛,请立即用清水或生理盐水冲洗,必要时请就医。
裂解液如有白色絮状物析出属正常现象,置于 37℃水浴中溶解即可。