测定的原理1、首先把搅拌器置于培养箱内，按预先选择的量程及测量范围，将定量体积的水样倒入培养瓶，放在搅拌器上连续搅拌。2、然后培养箱内温度控制在20℃±1℃，水样恒温后进行五日培养。培养瓶中必须保证足够的溶解氧。样品中的有机物经过生物氧化作用，转变成氮、碳和硫的氧化物，在这一过程中，从水样中跑出来的唯一气体二氧化碳被氢氧化钠（或氢氧化钾）吸收。3、瓶中空气压力减少量，相当于微生物所消耗的溶解氧量，这样，样品BOD5值与瓶中空气压力减少的程度成正比，通过测量空气压力的变化可以得到BOD5值。增加或减少所取样品的量可以增加或降低压力减少值。这样操作者无须繁杂的稀释步骤就能准确测量很宽范围的BOD5值。培养瓶中空气压力的变化是通过半导体压力传感器来进行检测的，由LCD显示器循环显示各样品的BOD5值及生化反应曲线。
四种无机盐的制备取四只容量１升清洗干净的容量瓶，按以下方法配制：1、缓冲液用蒸馏水溶解下列试剂并稀释至１升。（1）21.75g磷酸氢二钾（K2HPO4）。（2）8.5g磷酸二氢钾（KH2PO4）。（3）33.4g磷酸氢二钠（Na2HPO4·7 H2O湿度在61.07％～80.51％稳定）。（4）1.7g氯化铵（N H4Cl）。2、硫酸镁溶液
实际样品BOD5的测量1、接通培养箱电源，将培养箱上温度开关拨至“设置”位置，调节温度电位器旋钮，使表头显示温度为20℃，然后将温度开关拨到“测量”位置。搅拌器放进培养箱内，将培养箱内的连接线与搅拌器左测板的37芯插座相连并固定紧；将仪器主机与培养箱后面板用专用连接线并固定紧，打开仪器主机电源。2、预先估计被测样品的BOD5值范围，选择接近的量程。如无法估计，可先测定该样品的COD值，然后根据该样品COD值来确定该样品的BOD5值，（通常样品BOD5值为该样品COD值的0.8倍）。对BOD5值在1000mg/L以下，含有足够的需氧微生物的样品，不需接种，可以直接根据选定的测量范围，从取水样量表中查得取样量。根据所测样品数量的多少（最多可测８个样品）来确定用几个培养瓶测定其中一个样品。如果只有两个水样，可选择２～４个培养瓶测定其中一个水样，预先估计该水样的BOD5值的范围，确定每个培养瓶的取样量，从而确定几个培养瓶所需的总取样量。将该水样放在一个大烧杯中（1000mL或2000mL），每升水样加入四种无机盐各1mL。将烧杯放入培养箱中搅拌器上搅拌恒温（2～3小时）。同时必须调节该水样的pH值，应为6.7～7.5（最佳点为pH7.2）。如超出这一范围，可用适当浓度的氢氧化钠或硫酸中和。然后用量筒按确定好的取样量量取水样倒入培养瓶中。同理，可测定另几个水样。
每只培养瓶中放入１只搅拌子，培养瓶放在搅拌器相应位置上，注意培养瓶号与搅拌器面板上通道号的对应关系，一般连接距离越短越好，并规定里面的瓶号左起为“2”、“4”、“6”、“8”号，位置在培养箱里侧；与塑料管靠近的瓶号左起为“1”、“3”、“5”、“7”号，位置在培养箱外侧；八个压力传感器的顺序左器为“1”、“2”、“3”、“4”、“5”、“6”、“7”、“8”号，位置在培养箱外侧。并对试验水样进行搅拌，直至水样温度达到20℃±1℃（约需1～2小时）。 4、取８只清洗干净的密封杯，杯中放入占总高度约1/4的固体NaOH或KOH（或5～6粒NaOH颗粒），将密封杯与瓶口及连接头接触的两个面涂抹上薄薄的一层真空硅脂，然后置于每个瓶口。如密封性好也可不涂。将与软管连接的瓶盖在培养瓶上旋紧，同时将搅拌器上８只参考气压仓的密封螺栓旋紧，此过程中切勿使NaOH或KOH掉入培养瓶中。5、稳定30分钟后，对仪器主机进行操作。
实验前将参考气压仓密封旋钮松开，使内部气压与大气压相等。
实验前将参考气压仓密封旋钮松开，使内部气压与大气压相等。