用理化方法除去密闭容器中的氧，造成无氧环境，以利于专性厌氧菌生长。常用的方法有抽气换气法和气体发生袋法。
1）换气法：利用真空干燥缸或厌氧罐。将已接种的平板放入缸或罐中，放入催化剂钯粒和指示剂美蓝，先用真空泵抽成负压99.99kPa（750mmHg）,然后充入无氧氮气，反复三次，最后充入80%N2、10%H2和10%CO2的混合气体。如缸（罐）内已达无氧状态，则指示剂美蓝为无色的美白。每次观察标本需重新抽气换气，用过的催化剂钯粒干烤160℃2h可恢复活力而重复使用。
2）气体发生袋法（Gas-pak法）：①厌氧罐：由透明的聚碳酸酯或不锈钢制成，盖子内侧有金属网状容器，用于装厌氧指示剂美蓝和用铝箔裹封的催化剂钯粒。②气体发生袋：是一个铝箔袋，内装硼氢化钠-氯化钴合剂和碳酸氢钠-柠檬酸合剂各一丸及一条滤纸条。使用时剪去指定部位，注入10ml水，水沿滤纸条渗到两种试剂丸，发生下列化学反应，产生H2和CO2。C6H8O7+3NaHCO3→Na3（C6H5O7）+3H2O+3CO2↑NaBH4+2H2O→NaBO2+4H2↑加水激发上述反应后，应立即将气体发生袋放入罐内，紧闭罐盖，使产生的气体释放于罐中。
采用无毒、透明不透气的复合塑料薄膜制成的厌氧菌培养袋。
袋内装有催化剂钯和2支安瓿，1支装有化学药品（成分同上），以产生一定比例的H2和CO2（H2、CO2发生器），另1支装有指示剂美蓝。使用时将已接种厌氧菌的平板装入袋内，用文具夹紧袋口，使成密闭状态。
然后折断放在袋内的产气安瓿，数分钟后再折断美蓝安瓿，若美蓝无色即表示袋内已处于无氧状态，即可置35℃孵育。
将需氧菌与厌氧菌同时在同一密闭环境内培养。
待需氧菌耗尽氧气后，厌氧菌开始生长。
将已知专性需氧菌（如枯草芽胞杆菌）和被检厌氧菌分别接种于两个等大的平板上，然后将两者合拢，缝隙用透明胶带密封，置35℃孵育即可。
按每100ml容积需用焦性没食子酸1g和2.5mol/L NaOH 10ml的用量，先将焦性没食子酸放入平皿盖背面折叠的灭菌纱布中，放于平皿盖背面，然后滴入NaOH，立即将接种好厌氧菌的平板扣上，用熔化的石蜡密封平皿与平皿盖的间隙，35℃孵育。
由于碱性溶液与焦性没食子酸作用，不仅吸收O2，也吸收CO2，对某些细菌生长不利，同时焦性没食子酸氧化时，可放出少量CO，也对某些细菌生长不利。为此，可将NaOH改为NaCO3，方法同上。
将庖肉培养基上面的石蜡熔化，用毛细滴管吸取待检标本，接种于庖肉培养基液体中，待石蜡凝固后置37℃孵育。
由于培养基中的肉渣可吸收氧气，石蜡凝固后阻断空气中氧气的进入，使庖肉培养基呈厌氧状态。