外源基因蛋白的诱导表达及蛋白质分离的方法

首先，分别挑取经PCR 鉴定为阳性的克隆和对照中的菌落，分别接种于含有卡那霉素(终浓度50pg 'mI)的液体LB培养基中，在37C、250r /min条件下培养过夜。

然后，按1: 50~1:100的比例分别吸取上述培养液于含有卡那霉素(终浓度50ug /mL)的100mL，液体LB培养基中，在37C、250r min 条件下培养3~4h，使其OD ，值达到0.6~0.8。

然后，加人IPTG(终浓度为0.5mmol/L)，在37C、250r/min条件下培养，进行外源基因的诱导表达，期间按不同的时间分别收集菌体，探索蛋白质最佳表达时间。

然后，在4C.4000r/min条件下离心20min，收集菌体，弃上清，加入5mL 的10mmol L 的Tris.Cl(pH8.8)于沉淀内，反复冻融几次，再离心，弃上清。

然后，在沉淀中加人2mL 的10mmol/L 的Tris.CI 缓冲液(pH8.)，再加2mL19 6的Triton X- 100，加溶菌酶至终浓度为100pg/mL，于30~C保温30min。

最后，用超声波处理上述溶液后，在12000r/min条件下离心5min，分别取上清和沉淀各15yL(沉淀要稀释)，分别加人15PL 2XSDS-PAGE上样缓冲液，混匀。每个样品在沸水中煮沸10~15min，同时将蛋白Marker 在95C热处理5min。