器材：量筒，虹吸管，碘量瓶，移液管
试剂：淀粉质试剂，硫酸锰溶液，碱性碘化钾溶液，浓硫酸，淀粉溶液
原理生化需氧量（biochemical oxygen demand ，BOD）作为水质有机污染综合指标之一，是指水中有机物在需氧微生物（主要是需氧及兼性厌氧细菌）的作用下，进行氧化分解过程中所消耗水中耗溶解氧的量，同时，也包括了如氧化硫、亚铁盐等还原性无机物所耗的氧量，这一部分通常仅占很小比例。由此可知，生化需氧过程的发生需具备三个条件：需氧微生物的存在，有足够的溶解氧，有适合微生物利用的营养物——有机物。在实际工作中，常以以20℃±1℃，培养5天后1L水中溶解氧减少的量（mg/L）来表示，称五日20℃生化需氧量，记为BOD5。它是一种间接表示有机物污染水体程度的指标。
对于污染情况不明或较严重的水样，通常采用标准稀释法。一般认为恰当稀释后的水样，在20℃培养5日后，剩余溶解氧至少有1mg/L或溶解氧减少40%～60%较为合适。为了达到这一要求，通常一份水样需同时做2～3个稀释度。一般稀释2、4、8倍。确定稀释倍数后，可按下法稀释水样：
（1）用虹吸管将500ml稀释水移入1L量筒内（应将虹吸管插至量筒底部，然后徐徐放出稀释水，随着水位上升，慢慢提起虹吸管，但管口始终在水下面）。按上法加入500ml水样。用搅拌器在水下面徐徐搅动4～5次，使充分混匀，用虹吸管将已稀释的水样移入已编号的两个溶解氧瓶内（装瓶时，虹吸管应先插至瓶底，边放水边往上提，直至装满后取出虹吸管，目的是尽量减少水样与空气接触），塞紧瓶塞，为稀释2倍水样。上述1L量筒内剩余的水，加等量的稀释水，然后仿上法用搅拌器混匀后再装入两个溶解氧内，稀释4倍水样。如此连续即可得稀释8倍水样。
（2）另取已编号的两个溶解氧瓶，用虹吸管装入稀释水，塞紧瓶塞，作为空白。
（3）检查各瓶编号，并从每个稀释倍数中各取一瓶（包括空白），用蒸馏水封口，放入20℃±1℃ 恒温箱中培养；其余各瓶分别测定其即时溶解氧。
①取下各溶解氧瓶的瓶塞，将吸管的尖端插入液面以下，加2ml硫酸锰溶液，边加边慢慢上提吸管。②再按相同的方式加2ml碱性碘化钾溶液。③盖紧瓶塞，注意勿使瓶塞下面留有气泡。将瓶颠倒混合2～3次，此时将有黄到棕色沉淀物形成，放置1分钟，再将瓶颠倒数次，使充分混匀。④用吸管沿瓶口加2ml浓硫酸，盖紧瓶塞，颠倒混合，放置5分钟，至棕色沉淀完全溶解为止。⑤用100ml球形吸管吸出100ml，置于250ml碘量瓶内，一式两份，立即用0.025mol/L Na2S2O3标准溶液滴定至溶液呈淡黄色，加0.5%淀粉溶液1ml，继续滴定至蓝色刚褪去即为终点。记录用量V1（ml）；同法再滴定另一份，记录用量V2（ml）。按下式计算溶解氧量： 公式在图片中
对放在培养箱中的各瓶，要每天检查培养箱（没有培养箱的可以用恒温水浴代替）的温度及添加封口用的蒸馏水。保持恒温和水封。从开始培养的时间算起，经过整整五天以后从培养箱内取出溶解氧瓶，测定溶解氧。两次溶解氧量之间在后面求差。
计算式在图片中：式中D1——稀释样品即时的溶解氧；D2——稀释样品培养五日末的溶解氧；B1——稀释水的即时溶解氧；B2——稀释水培养五日末的溶解氧；f1——稀释水在水样中所占的比例；f2——水样在稀释样品中所占的比例。
1.测定溶解氧时，试剂的加入方式比较特别，应将移液管尖插入液面之下，慢慢加入，以免将空气中氧带入水样中引起误差。
2.要注意淀粉指示剂的加入时机，应该先将溶液由棕色滴定至淡黄色时再加淀粉指示剂，否则终点会出现反复，难以判断。
3.稀释水要对水样进行稀释，就需要用一定的溶剂去稀释它。BOD测定所用的稀释溶剂是含有一定养分、溶解氧饱和的蒸馏水（称为稀释水）。具体操作是取一定量的蒸馏水，向水中加入钙、镁、铁等物质作为微生物的营养物，用磷酸缓冲液将蒸馏水的pH值调整到7左右。向蒸馏水中冲氧至饱和。
4.测定溶解氧时须注意，在采样和操作时必须防止水中有气泡的产生。
5.水中含有过量有毒物质会抑制微生物的生长，此时需用稀释水进行稀释。
8.如果几个稀释倍数的溶解氧下降都在40%～60%。则选用稀释倍数最高的那一组。若都不在40%～60%范围内，则选用最接近的一组。
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