试剂：tris、Hcl、Nacl、脱脂牛奶、甲醇、甘氨酸、tuwen20、一抗、二抗、显色剂及SDS-PAGE需要的试剂（tris、Hcl、TEMED、SDS、过硫酸铵、丙烯酰胺、N,N-甲叉双丙烯酰胺、甘氨酸、非预染蛋白Marker、甲醇、乙酸、考马斯亮蓝R250）、预染蛋白Marker
耗材：滤纸、PVDF膜或NC膜、乳胶手套等
仪器：电泳仪、电转槽、摇床、制冰机（电转时需冰浴）等
蛋白质抽提实验对象为组织样品，取适量(250~500mg)新鲜组织样品或正确保存的组织样品，加1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂(或核蛋白抽提试剂)，匀浆后抽提总蛋白(或核蛋白)。实验对象为细胞样品，每份样品取1×106~1×107细胞，PBS清洗细胞，去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂(或核蛋白抽提试剂)抽提总蛋白(或核蛋白)。
蛋白质定量：按BCA蛋白质定量试剂盒操作说明操作，测定样品浓度。
变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳(SDS-PAGE)：将准备好的样品液和预染蛋白marker分别上样，标准加进第一个孔中，电泳分离蛋白。
蛋白质转移到PVDF膜，按Bio-Rad蛋白转移装置说明组装滤纸凝胶纤维素夹层，30mA恒流条件下，4°C转移过夜。
western blot膜的封闭和抗体孵育膜在5%脱脂奶粉溶液中室温孵育1小时以封闭膜上的非特异结合。封闭过的膜加入一抗室温孵育1.5小时，抗原抗体结合。加入HRP标记的二抗体以结合一抗，室温孵育膜1小时。加入HRP标记的GAPDH抗 体可同时检测GAPDH含量。
western blot结果检测：化学发光法检测，膜与化学发光底物孵育，经X胶片曝光显 影。图片扫描保存为电脑文件，并用GIS1000分析软件将图片上每个特异条带灰度值的数字化。
western blot数据分析：目的蛋白的灰度值除以内参GAPDH/Actin的灰度值以校正误差，所得结果代表某样品的目的蛋白相对含量。
提供实验报告，包括详细的实验方法及免疫印迹实验结果的相关数据。
1. 泡膜：转膜之前将海绵、胶、膜都用预冷的转移buffer浸泡20min； a. 凝胶若是没在预冷的转膜buffer中浸泡，就会在转膜过程中出现凝胶皱缩，导致出现转移条带变形。 b. PVDF膜具有疏水性，需用甲醇浸泡。 2. 转膜顺序：阴极碳板+海绵+三滤+胶+膜+三滤+海绵+阳极碳板； 3. 转膜条件：0.35 A/250 V/1 h/40 min/冰浴中进行转膜（转膜过程产生大量的热，注意冷却）； （具体转膜时间要根据目的蛋白的大小而定；目的蛋白的分子量越大，需要的转膜时间越长，反之则短。） 4. 其它注意事项： a. 避免直接用手碰杂交膜，使用镊子。因为手上的蛋白和油脂会影响转膜效率并会使膜脏掉。 b. 夹好膜和凝胶后，确定在凝胶/膜和滤纸之间没有气泡存在，否则会导致转膜不完全。 c. 保证膜和滤纸的大小和凝胶完全一样，过大和过小都会影响转膜效率。 d. 鸡来源的抗体与PVDF和尼龙膜有较强的结合能力，从而产生较高的背景，故如果选择鸡来源的抗体最好使用硝酸纤维素膜（NC膜）。