作为一名医学方面的科研工作者，免疫荧光是大家常用的技术手段，今天我就教给大家如何做一张好的免疫荧光的片子。
工具/原料
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冰冻切片若干，一抗二抗准备就绪，4%PFA（多聚甲醛）溶液100ml，3%BSA溶液，0.4%tritonx-100
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3%BSA溶液和0.4%tritonx-100各100ml
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荧光显微镜一台
方法/步骤
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首先油笔画圈，再利用4%PFA溶液固定切片20min，注意4%PFA要用PBS配制，否则容易引起细胞肿胀，免疫荧光最好的效果不好，固定完，1*PBS洗3次。
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0.4%tritonx-100，通透10min，室温，然后1*PBS洗3次。
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3%BSA对每个标本封闭1h，室温。
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封闭过后，不必洗，而是要把多余的BSA吸走，一抗孵育4度过夜，我用的是抗opsin抗体。
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第二天1*PBS洗3次，洗去未结合的一抗，然后孵育二抗，室温40分钟，注意你的二抗是488还是594的，因为不同的激发光的颜色是不一样的，我用的594发红光。
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二抗孵育完毕，1*PBS洗3次洗去未结合的二抗，滴加DAPI用干净的盖玻片封片
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荧光显微镜观察。
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让大家看看我用rhodopsin做的图片哦
注意事项
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二抗不能孵育超过1h，否则背景很强。
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一抗二抗使用前都要离心，沉淀会影响实验结果。