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怎样对蛙心灌流实验做出分析

离体心脏灌流是研究心脏功能的重要手段之一,广泛应用于医学、生物学、药学等教学和科研工作中。采用离体心脏灌流系统可以直观地观察心脏的活动,研究心脏舒缩功能,心率和节律变化,前后负荷及各种体液因素等对心脏功能的影响 。采用蛙心脏进行离体心脏灌流是较为常用的一种模型,因其稳定,经济,一直被人们广泛采用。进行离体心脏灌流实验,首先需要保证心脏在体外较长时间存活,然后根据实验目的进行灌流和施加实验因素。无论是心脏离体前的插管、血流冲洗等操作,还是心脏离体后用人工溶液代替血液进行灌流,均使心脏脱离了生理性神经体液环境。因此,使离体心脏较长时间存活,并维持良好的状态对于完成实验和取得可靠实验数据极为重要。
工具/原料
1

D95-微机化生理药理学实验教学系统,张力换能器,蛙心夹,木质试管夹,铁架台,双凹夹,蛙心插管,蛙类手术器械,滴管,线

2

任氏液,0.65%NaCl,1%CaCl2,1%KCl,1:10000肾上腺素溶液,1:10000乙酰胆碱溶液

3

蛙或蟾蜍

步骤/方法
1

离体蟾蜍心脏的制备 (1)取一蟾蜍毁其脑和脊髓,仰位固定于蛙板上,暴露心脏的方法同实验9。 (2)心脏插管 分支前的主动脉下穿一线并打一松结备用 ,左侧主动脉穿一根线并结扎之,用左手提起结扎线,右手用眼科剪在左侧主动脉距分叉部3mm处剪一“V”型口。将盛有少量任氏 液的蛙心套管(用拇指将套管堵住,以防套管中的任氏液流出)从“V”型口插入动脉球底部,然后稍后撤套管,再转向心室中央方向插入,可见液面随心搏升降即可。将分支前主动脉下的松结扎紧,并固定在套管的小突上。小心提起套管和心脏,剪断主动脉左右分支;结扎与静脉窦相连的后腔静脉,并在结扎线以下剪断,将心脏摘出。 (3)用铁支柱上的试管夹夹住套管、蛙心夹夹住蟾蜍的心尖。将蛙心夹的线与万能杠杆相连,(蛙心夹与换能器和二道仪连接亦可),描笔尖上与记纹鼓面接触即可观察(图6-11-1)。

2

观察项目 (1)开动慢鼓描计一段正常心搏曲线,注意观察心跳频率和强度以及心脏的收缩、舒张程度。 (2)把蛙心套管内任氏液全部换为0.65%NaCl溶液,观察心跳变化。 (3)把0.65%NaCl溶液吸出,换以任氏液,加入3%CaCl2溶液1~2滴,观察心跳变化。 (4)把含3%CaCl2的溶液吸出,换以任氏液,加入1%KCl溶液1~2滴,观察心跳变化。 (5)把含KCl的溶液吸出,换以任氏液,加入0.01%肾上腺素溶液2~3滴,观察心跳变化。 (6)把含肾上腺素的溶液吸出,换以任氏液,加入0.01%乙酰胆碱溶液1~2滴,观察心跳变化。 (7)把含乙酰胆碱的溶液吸出,换以任氏液,加入3%乳酸溶液1~2滴,观察心跳变化。待心跳变化明显时,立即加入2.5%NaHCO3溶液1~2滴,观察心跳逐步恢复。注意事项

3

避免过度牵拉静脉窦,否则离体后的心脏可能出现搏动异常;

4

注意保留静脉窦的完整性,为防止误伤静脉窦,剪取心脏时可将剪尖朝下进行剪切;

5

蛙心离体后若搏动不良,蛙心管内液面不波动,多为固定线牵拉过紧所致,可用眼科镊夹住扎线处稍稍向下移动蛙心即可;

6

注意常用任氏液湿润蛙心表面。

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