正常异体CIK细胞培养:1.密度梯度离心的方法将健康成人的外周血分离出来；2.然后制备单个核细胞悬液,控制细胞的浓度在1×106个/ml进行培养；3.在培养的第一天时加入2干扰素(IFN2γ)1000u/ml；4.培养24小时以后再加入重组人白介素22(rhIL22)300u/ml,重组人白介素21(rhIL21)100u/ml,抗CD3单克隆抗体50ng/ml；5.以每三天为间隔进行培养基和rhIL22的更换，把细胞的浓度调整至2×105个/ml；6.经过这样制备出的细胞就是CIK细胞。培养15天后细胞会扩增754倍，观察培养至30天时的CIK细胞能够发现细胞扩增的峰值会出现在第21~28天时，细胞能够扩增1000倍以上。用胸腺嘧啶对培养的CIK细胞进行检测能够确定抗CD3单抗时促进CIK细胞增殖的重要物质而IFN2γ与rhIL21对细胞的增殖基本不起作用，而毒力检测后发现IFN2γ先于rhIL21加入后能够提升细胞毒性，再加入IL21毒力会进一步增强。但是如果这三种因子同事加入后细胞的毒力就会下降，因此在CIK细胞培养时必须控制好因子加入的时机。CIK细胞扩增培养的方案中这几种因子都有着非常重要的用途。目前异体CIK细胞培养往往用于研究而不进行临床试验因为这样的风险相对较高不建议使用。自体CIK细胞培养:自体CIK细胞培养在临床治疗方面有着非常明显的优势,因为取自患者自身的组织进行培养因此发生疾病交叉感染的风险就会大大的降低,安全性方面有非常大的保证。在常规观察上正常人与慢性粒细胞白血病(CML)患者细胞没有明显的差异,但是在培养的过程中CML患者的CD3+CD56+细胞的可扩增性却非常的低。CML患者CIK细胞培养时CD3+细胞(T细胞)的会首先出现增殖但是非T细胞却慢慢的被淘汰,不过这种明显的增殖却不是恶性的·克隆Ph染色体呈阴性,然而Ph染色体呈阳性的将被淘汰因此能够安心的使用这种方法去扩增CML患者体内的CIK细胞再进行免疫治疗。经过试验证明培养儿童肿瘤患者的外周血单个核细胞扩增CIK细胞时,CD3+CD56+细胞增殖会大幅增高并且对PBL有杀伤活性。
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