甲醇 乙腈 异丙醇 冰乙酸
首先我们要先确定出现这种情况是因为色谱柱的原因，而不是仪器部分造成的。然后才能很好的解决问题哦。虽然主要适用于做添加剂，其他的也可以作为参考咯。条件有限的话，死马当活马医。 在讲之前先说些废话，添加剂前处理比较简单，要真正有效的提高色谱柱的使用寿命，尽量都先用滤纸过滤，再用0.45μm或者0.22μm微孔滤膜过滤，再有条件一点的话就加保护柱咯。PS：保护柱价格贵，还得买保护柱套，说实话保护柱也不耐用。 就添加剂来说，这种情况大部分都是柱子堵了。注意观察压力是不是变大了，有时候明显，有时候不明显。因为正常使用被污染的概率不大，除非是做研究而不是平常的检测样品。大批量进样之后，特别容易出现这种情况。下面给大家提供一些可选方案，尝试着抢救一下。 首先正常冲柱，除去色谱柱中的缓冲盐，10%甲醇冲久一点，再换成100%甲醇。
下面有几个方案可选， 1、将水换成酸，甲酸乙酸都可以，建议用乙酸，因为0.1%的甲酸PH接近2.5了，C18柱都有一个PH使用范围的，所以太酸了会损坏柱子，0.2%冰乙酸PH大概4.5左右比较合适。然后设置一个梯度洗脱的程序，时间上面是长一点好。3-4个小时吧！最后再正常冲柱。说实话，这方案效果一般。用乙腈和水梯度冲一冲效果都比这个好。但这种方案对柱子几乎没有损伤。
2、下面说的是反冲，顾名思义就是反接色谱柱，因为现在的色谱柱两头都有塞板，反冲问题不大，并不会对柱子造成太大的损伤。用甲醇和水梯度反冲都会有一定的效果，如果没有就换成5+95乙腈和水。无论怎么冲最后都要换100%纯有机相冲40分钟以上。其中最强的洗脱效果要数75%的乙腈，用这个比例会对柱效有点影响。前面两种方式无效再用75%乙腈，因为柱子可能不分叉了，但是峰形会没有原来那么尖锐
3、上面的第二种方案能解决大部分问题的了，最后这种是真的是死马当活马医了，正接5+95乙腈水，再换100%乙腈，然后换异丙醇0.3ml/min流速过夜，最后换甲醇。 像四氢呋喃，氯仿这种我就不介绍了，真的不建议这样，说实话，添加剂做不了还可以用来做其他的，因为想甲醇水，乙腈水，之类不是缓冲盐做流动相的检测项目挺多的，做这些柱子还是可以用的
关于新柱用这个方法冲一冲再使用，寿命会长些。 60%甲醇或乙腈平衡3-4小时，换5%-95%梯度洗脱模式，最后用纯甲醇或乙腈保存。之后再使用