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手把手教你用Quantity One计算电泳条带的分子量

Quantity One软件对做分子生物和生物化学的电泳实验的同胞们异常熟悉,可是这个软件功能非常庞大,又是全英文版,对于不喜欢看a,b,c的同胞一定很头疼,在此小编手把手教你如何用Quantity One计算电泳条带的分子量,其他功能大同小异,希望给大家带来帮助。
工具/原料
1

电脑

2

Quantity One

方法/步骤
1

打开Quantity One软件,如果弹出以下窗口,点击Basic即可打开

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点击打开按钮(箭头所示),或者点击File——Open,在窗口空白区域单机鼠标左键,弹出文件窗口,选中需要打开编辑的电泳图片(图片格式必须是tif格式,如果是其他格式的图片,可以用PS进行转换),即可将图片打开

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点击Lane菜单,选择Sigle Lane中的Creat Lane,将鼠标移至打开的图片中,这时鼠标后面会有一个绿色的加号,选择一个marker泳道和需要计算分子量的泳道,每个泳道重上至下的创建。这种方法是单个泳道一个一个的创建,创建时注意在每个泳道条带的正中间开始创建,减少跑电泳时条带的不整齐对结果计算的影响,并且创建的泳道线(红线)一定要垂直。也可以用Frame Lane,把整个胶边框框起来,再进行泳道的调整。个人喜欢单个创建,比较灵活

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点击Band菜单,选则Create Band,这时是要创建每个泳道中条带的位置。再将鼠标移动至图片位置,同样鼠标后面呈现绿色加号形式,用鼠标依次点击marker的条带位置。最后点击你所测定的目的条带。泳道中创建Band时也要在条带的中间位置创建,以免跑电泳时加量过多使跑出来的条带过宽,进而影响测定结果

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点击Match菜单,选择Standards,选择New Standard,编辑好所创建的marker的名称,并依次输入你所跑的marker的分子量(KDa栏)和所对应的名字(Name栏),点Achive保存

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再次点击Match菜单,选中刚编辑的marker名称,弹出所编辑的marker列表。点击列表左侧Type 1所对应的箭头(图中箭头标注处),再到图中所对应分子量的marker泳道中点击一下(图中箭头标注处),此时marker泳道就自动产生了

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继续点击Match菜单,选择标准曲线Standard Curve,然后点击marker泳道条带1所在位置,弹出对话框,选择Point To Point点对点半对数的形式曲线,对话框右边选项全选,这时就创建好了marker的标准曲线了,所对应的分子量会自动生成

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随后点击需要测定泳道的条带,分子量就会自动计算出来。此时如果论文中需要所计算的图片增加说服力,则截图拷贝即可

注意事项
1

使用Quantity One计算分子量对所跑的电泳胶的质量要求非常高,因而在跑电泳时需格外注意,同时对样品的纯度要求也极为苛刻,因而获得一个好的结果前期基础也需打好

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