质粒提取是分子生物学中最基本的操作,也是很关键的步骤。因此必须掌握
工具/原料
1
过夜培养的大肠杆菌(含有质粒)
2
质粒提取试剂(溶液I,II,III和异丙醇)
3
无菌1.5小离心管
4
80%乙醇
方法/步骤
1
13000rpm高速离心过夜培养的大肠杆菌(含有质粒)菌液1min
2
弃掉上清,留菌体,加100ul的溶液I,充分悬浮得到浑浊液
3
加入200ul的溶液II,轻柔颠倒20次,浑浊液澄清
4
加入150ul的溶液III,颠倒10次,出现块状白色沉淀
5
13000rpm高速离心5min,转移上清液到新小离心管中
7
13000rpm高速离心5min,倒掉上清液,加入80%乙醇轻轻洗涤。
8
13000rpm高速离心1min,倒掉上清。倒扣小离心管于吸水纸上,50℃烘箱中保温5min
9
加入20ul无菌双蒸水溶解,-20℃冷冻存贮
注意事项
1
操作一定要精准,体积本来就少
2
要注意干净,不要用手摸离心管口
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